Notas de Aplicaciones
21jun/11

DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE KJELDAHL / KJELDAHL METHOD FOR PROTEIN DETERMINATION

Francisco Santiago. Engineering Department.

INTRODUCCIÓN

El contenido total de proteínas en los alimentos está conformado por una mezcla compleja de proteínas. Estas existen en una combinación con carbohidratos o lípidos, que puede ser física o química. Actualmente todos los métodos para determinar el contenido protéico total de los alimentos son de naturaleza empírica. Un método absoluto es el aislamiento y pesado directo de la proteína pero dicho método se utiliza  sólo a veces en investigaciones bioquímicas debido a que es dificultoso y poco práctico

En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado en la actualidad para el análisis de proteínas (método Kjeldahl) mediante la determinación del nitrógeno orgánico. En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores.  El nitrógeno orgánico total se convierte mediante esta digestión en sulfato de amonio.  La mezcla digerida se neutraliza con una base y se destila posteriormente. El destilado se recoge en una solución de ácido bórico.  Los aniones del borato así formado se titulan con HCl (o H2SO4) estandarizado para determinar  el nitrógeno contenido en la muestra.

El resultado del análisis es una buena aproximación del contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno también proviene de componentes no proteicos.

El método Kjeldahl ha sufrido varias modificaciones. Originalmente se utilizó permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación (digestión), sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó.  En 1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión utilizando ácido sulfúrico y añadiendo un catalizador.  Gunning en 1889 propuso añadir  sulfato de potasio que eleva el punto de ebullición del ácido sulfúrico utilizado en la digestión para disminuir el tiempo de la reacción.

En  la actualidad se utiliza principalmente Sulfato de Cobre penta hidratrado CuSO4.5H2O como catalizador.

REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL MÉTODO DE KJELDAHL

DIGESTIÓN

catalizadores→
(1) n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
proteína                                calor→

NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN

(2) (NH2)SO4 + 2 NaOH          →          2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
(3) NH3 + H3BO3 (ácido bórico)         →          NH4 + H2BO3- (ión borato)

TITULACIÓN

El anión borato (proporcional a la cantidad de nitrógeno) es titulado con HCl (o H2SO4) estandarizado:

(4) H2BO3- + H+             → H3BO3

MATERIAL
J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realización del procedimiento por el método Kjeldahl.

-1 bureta electrónica “Digitrate-Pro 50”  resolución 0.01 ml.
Código 0182026

-1 balanza analítica de precisión “FA-2204B” resolución 0,1mg.
Código
5830039

-1 Unidad de digestión (Bloc Digest) para 6, 12 y 20 plazas.
Códigos
4000629, 4000630, 4000631

-1 Unidad Scrubber.
Código
4001611

-1 Bomba de circulación de agua.
Código 4001612

-1 Aparato destilador Kjeldahl (Pro Nitro M, S o A).
Códigos 4002627, 4002851, 4002430

- Material diverso de laboratorio

REACTIVOS

Reactivos preparados:

Es aconsejable la utilización de reactivos ya preparados, especialmente el HCl (o H2SO4) de valoración. Cualquier error en su preparación puede afectar directamente al resultado de la determinación.

Utilizar los siguientes, o sus equivalentes en otras marcas:

•      Ácido Bórico (en polvo) 99.5%     PANREAC 141015
•      Indicador  mixto 4.8 (ó 5) RV   PANREAC 283303

(Rojo metilo + Verde de Bromocresol)

•      Indicador mixto  4.4 RV   PANREAC 282430

(Rojo metilo + Azul de Metileno)

•      HCl 0.1N SV   PANREAC 171023
•      HCl 0.25N SV   PANREAC 182318
•      H2SO4 0.1N SV   PANREAC 181061
•      H2SO4 0.2N SV   PANREAC 182011
•      Sodio Hidróxido 40% RE   PANREAC 171220

(Para determinación de N)

•      Acetanilida 99% (Patrón para validación)   PANREAC 151005
•      Amonio sulfato (Patrón para validación)   PANREAC 131140
•      Catalizador Kjeldahl 6.25% Cu tabl. 8g   PANREAC 174428

Preparación de la solución fijadora de amoníaco

1.- Con indicador Mixto 4.8 (ó 5)

Preparar la solución de la siguiente fórmula para 1 litro de solución fijadora:

•      Pesar 10g de Acido Bórico (en polvo)   PANREAC 141015
•      Disolverlo en 1 litro de agua destilada.
•      Añadir 15ml de Indicador mixto 5.   PANREAC 283303

2.- Con indicador mixto 4.4

Preparar la solución de la siguiente fórmula para 1 litro de solución fijadora:

•      Pesar 10g de Ácido Bórico (en polvo)   PANREAC 141015
•      Disolverlo en 1 litro de agua destilada.
•      Añadir 10ml de Indicador mixto 4.4.   PANREAC 282430

PROCEDIMIENTO

REPARACIÓN DE LA MUESTRA
  1. Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra.
  2. Pesar entre 1 y 2 gramos de muestra.
  3. En muestras con contenidos de nitrógeno muy pequeño, tomar la muestra suficiente para que contenga como mínimo 5 mg de nitrógeno.
DIGESTIÓN

•   Añadir entre 10 y 15 ml (tubo macro) de H2SO4 96-98% y 1 tableta (8 gm) de catalizador.
(Para el tubo micro, el máximo de H2SO4  es 5ml)
•   Montar un sistema para la extracción de humos o scrubber con Na2CO3.
•   Realizar la digestión en tres pasos:

1. En función del contenido de agua de la muestra, empezar la digestión evaporando agua a 150ºC entre 15 y 30 minutos.
2.
Realizar un segundo paso entre 270 y 300ºC entre 15 o 30 minutos para reducir la producción de humos blancos.
3.
Continuar la digestión a 400ºC entre  60  y 90 minutos.

Algunos ejemplos:

Queso o carne:
Paso1º: 150ºC / 30’            Paso 2 : 270ºC / 30’            Paso 3: 400ºC / 90’

Cereales:
Paso1º: 150ºC / 15’            Paso 2 : 300ºC / 15’            Paso 3: 400ºC / 60’

Control Visual: El resultado es un líquido transparente nítido con coloración azul claro, verde o amarillo dependiendo del catalizador utilizado. No deben quedar restos negros adheridos a la pared de tubo.

Nota: Durante la digestión debe controlarse la producción de espuma en las muestras. Si esta es excesiva, debe alargarse el paso nº 1.

DILUCIÓN

•   Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a Tª ambiente. (Puede forzarse     sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un poco de agua).
•   Añadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.
•   Añadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la muestra. Si es necesario     calentar ligeramente el tubo (por ej. introduciéndolo en el bloque digestor todavía caliente)
•   Dejar enfriar de nuevo hasta Tª ambiente.
•   Para evitar pérdidas de nitrógeno y reacciones violentas no introducir el tubo todavía caliente     al destilador.

DESTILACIÓN

•   Situar un Erlenmeyer de 250ml a la salida del refrigerante con 50ml de ácido Bórico y unas     gotas de indicador.
•   Programar una dosificación de 50 a 75 ml de NaOH.
•   Introducir el tubo con la muestra en el destilador.
•   Destilar hasta recoger 250ml en el Erlenmeyer (50ml Bórico + 200ml de destilado).

Control Visual: Una vez se ha añadido el NaOH, la muestra debe tomar una coloración azulada, de no ser así, añadir más NaOH.

VALORACIÓN Y CÁLCULO

•   Valorar el destilado con HCl ó H2SO4  hasta el cambio de color. (punto final: pH 4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
•   Realizar el cálculo:

mg N = N x  V   x  14

Donde:

N = Normalidad del ácido de valoración
V = Volumen de ácido consumido
14 = Peso atómico del nitrógeno.

•   Para pasar a contenido de proteínas corregir por el factor adecuado según la naturaleza de la     muestra. (6.25 por defecto)
•   Periódicamente realizar un ensayo en blanco y restarlo del resultado.

% Proteínas =   P2/P0 x 100 x F

Donde:

P2: Nitrógeno (mg).
P0: Peso de la muestra (mg).
F: Factor proteínico.
(6.25 por defecto)

Factor protéico de algunos alimentos:

Almendras  5,18
Nueces 5,30
Nueces - cacahuetes  5,41
Gelatina 5,55
Soja 5,71
Cebada, avena, centeno 5.83
Trigo, harina entera 5,83
Harinas (no entera) 5,70
Arroz  5,95
Maíz  6,25
Todos los otros alimentos 6,25
Salvado 6,31
Leche y lácteos 6,38

VERIFICACIÓN DE LA RECUPERACIÓN CON AMONIO SULFATO

Esta verificación es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del destilador.

Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrógeno es conocido. Esta se destila, se valora con HCl 0.25N y se calcula el Nitrógeno detectado.

El porcentaje de nitrógeno detectado sobre el de la muestra se denomina recuperación de Nitrógeno.

Preparar la muestra:

Contenido de nitrógeno de una muestra de Amonio sulfato :

Formula: (NH4)2 SO4
Peso molecular: 132.14ç
Factor: 14 * 2 / 132.14 = 0.212
mg de Nitrógeno = 0.212 * mg de Amonio sulfato

•   Pesar unos 100mg  de amonio sulfato. El peso exacto será P0
•   La cantidad exacta de Nitrógeno es:

P1  (mg) = P0   x 0,212

•   Destilar añadiendo 25ml de NaOH
•   Una vez destilado y valorado obtenemos el nitrógeno (mg) detectado: P2

P2 =  N  x  V   x  14

Donde:

N  = Normalidad del ácido de valoración (HCl  0.25)
V  = Volumen de ácido consumido
14 = Peso atómico del nitrógeno.

•   Calculamos la recuperación:

R(%) = P2 / P1 *100

•   La recuperación aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.

Si se utiliza HCl de normalidad diferente preparar muestras:

NormalidadMuestra de Amonio sulfato.

0,05                               20 ...  40 mg

0,1                                 40 ...  90 mg

0,25                               100  …  200 mg

0,5                                 200  …  400  mg

VERIFICACIÓN DE LA RECUPERACION CON ACETANILIDA

Esta verificación es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del proceso completo del análisis del nitrógeno Kjeldahl que incluye las etapas de digestión, destilación y valoración.

Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrógeno es conocido. Esta se digiere, se destila, se valora y se calcula el Nitrógeno detectado.

El porcentaje de nitrógeno detectado sobre el de la muestra se denomina recuperación de Nitrógeno.

Para realizar ésta verificación se utiliza la Acetanilida.

Preparar la muestra:

Contenido de nitrógeno de una muestra de Acetanilida :

Fórmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrógeno = 0.1035 * mg de Acetanilida

•   Pesar alrededor de 250mg  de acetanilida. El peso exacto será P0
•   La cantidad exacta de Nitrógeno es:

P1  (mg) = P0   x  0,1035

Digestión de la muestra:

•   Colocar la acetanilida en un tubo, añadir 10ml de ácido sulfúrico 98%  y una tableta de     catalizador Kjeldahl.
•   Digerir a 400ºC durante 1h. (El resultado debe ser un líquido transparente con coloración     azul.)
•   Dejar enfriar y añadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar precauciones para evitar     salpicaduras. La reacción del agua sobre el ácido sulfúrico es violenta.

Destilar:

•   Destilar añadiendo 75ml de NaOH. Utilizar HCI 0.25N  para la valoración.
•   Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrógeno (mg) detectado: P2

Donde:

N  = Normalidad del ácido de valoración (HCl  0.25).
V  = Volumen de ácido consumido.
14 = Peso atómico del nitrógeno.
P2 = N  x  V   x  14

•   Calculamos la recuperación:

R(%) = P2 / P1 *100

•   La recuperación aceptable es entre 99.5 y 100.5 %.

FUENTES DE ERROR

Las principales fuentes de error son:

En el proceso de digestión:

1.- La inclusión de nitrógeno no protéico (aunque la cantidad de este nitrógeno suele ser despreciable comparada con la del nitrógeno protéico);
2.- La pérdida de nitrógeno durante la digestión. El exceso de sulfato de sodio o potasio  que se añade al ácido para elevar el punto de ebullición, puede producir una descomposición por calor y por lo tanto pérdida de nitrógeno. Por otro lado, el exceso de catalizador (de cobre generalmente) también puede producir pérdidas de nitrógeno
3.- La digestión incompleta de la muestra. Generalmente debida a falta de tiempo de reacción o falta de ácido sulfúrico.

Durante la destilación:

1.- Neutralización incompleta de la mezcla digerida. Es necesario añadir suficiente NaOH para neutralizar el exceso de ácido sulfúrico resultante de la digestión así como transformar todo el amonio formado en la digestión en amoníaco.
2.- Perdida de amoníaco por fugas en el circuito de destilación.
3.- Perdida de amoniaco por refrigeración insuficiente en el condensador.

BIBLIOGRAFÍA

A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists.  Official Methods of Analysis. Washington, D.C.
Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212.
Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products.  Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi.
Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2ª. Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.

Comentarios (146) Trackbacks (0)
  1. excelente información me fue de mucha ayuda…. se les agradece

  2. excelente información muy clara, me ayudo mucho

  3. EXCELENTE TRABAJO QUE PUEDE AYUDAR A LOS ESTUDIANTES Y MAESTROS PARA REALIZAR ESTE MÉTODO. FELICIDADES

  4. es una informacion muy completa espero y mucha gente mas hiciera este tipo de trabajos que ayuda mucho a personas como yo que aveces no nos acordamos bien de la tecnica

  5. muchas gracias por la informacion, esta bien detallada lo cual me ayuda para mi proyecto de analisis organico…gracias

  6. Perdon pero como logras hacer que el % de recuporación cumpla el criterio,

    Por ejemplo peso 3.3 g de SUlfato de amonio y los disuelvo e 250 mL de agua , los mg de N serian (3.3*.212) de 0.6996……p1
    Ok analizo 5 mL y gasto de HCl 0.1 N 9.5 mL
    P2= 9.5*0.1*14=13.3

    %R = (13.3/0.6996)*100 = 1901.08

    QUE ME FALTA????

    • Buenas tardes Araceli,

      El primer cálculo no es correcto porque la masa del sulfato de amonio debe estar en mg
      3.3 g (3300mg ) de sulfato de amonio contiene (3300*.212)= 699.3 mg de Nitrógeno.
      Si los disuelve en 250 ml de agua destilada la disolución tendrá 2.7984 mg de N / ml
      Si prepara como muestra 5 ml de esta 2.7984 mg de N. Es decir su muestra contiene 13.992 mg de N
      El consumo teórico de HCl 0.1 N es:

      HCl ml teórico ml = N( muestra) mg / (masa molecular de Nitrógeno x Normalidad HCl)

      HCl = 0.014 / ( 14.0067 x 0.1) ml HCl
      HCl = 9.99 ml HCl

      Es decir el consumo teórico de HCl 0.1 N para esa muestra es de 9.99 ml.

      Observaciones.
      1.- El peso de la muestra de sulfato de amonio tiene que pasarse primero a mg para hacer el calculo. (3300*.212)= 699.3 mg N (P1).
      Si realizamos es calculo con el peso en mg el resultado de la recuperación es del 95.10 %

      2.- Para conseguir una recuperación más próxima al 100% tiene que tener en cuenta al hacer los cálculos que la normalidad de HCl sea muy precisa.
      Ejemplo:
      Con N = 0.09 la recuperación es 85.59 %
      Con N = 0.10 la recuperación es 95.10 %
      Con N = 0.11 la recuperación es 104.61 %
      Es decir hay que tener en cuenta al hacer los cálculos que un error de una centésima en la normalidad del HCl provoca errores de orden del 5 % en la recuperación.
      Una botella de HCL 0.1 N abierta una semana antes aumenta su concentración dependiendo de las condiciones de almacenamiento (influye el calor, la humedad,…)

      Aconsejamos para hacer la verificación utilizar una botella de HCl abierta en el momento de realizar la prueba y una vez abierta guardarla en un refrigerador para que la normalidad varíe lo mínimo posible.

      Saludos y esperamos que la información le sea útil.

      Grupo Selecta

  7. En el proceso de titulacion o valoracion que es mejor? una bureta electronica o un valorador o titulador automatico? nosotros contamos con un destilador pro nitro M y hacemos una titulacion manual y queremos mejorar nuestros resultados, que valorador o titulador nos recomiendan?

    • En principio siempre es más preciso un titulador automático, sobre todo porque es más repetitivo pero se pueden obtener excelentes resultados (comparables a los del titulador) con una bureta electrónica (con resolución 0.01 ml) si el operario que la utiliza es metódico en su forma de trabajar.

      Para mejorar resultados lo más importante es la normalidad del reactivo utilizado en la valoración.

      1.- Que sea muy precisa. Por ejemplo si utilizamos HCl 0.100 N y por un error en la preparación las normalidad es 0.105 N la recuperación obtenida será del orden del 95%
      2.- El reactivo utilizado para valorar aumenta su concentración con el paso del tiempo debido a la evaporación.

      Con respecto a tituladores no podemos hacer ninguna recomendación, hay muchos en el mercado y trabajan con mucha fiabilidad.

      Saludos.

      Grupo Selecta

  8. Estoy muy interesado en conocer mas sobre estos analisis de obtencion del porcentaje de proteina en soya, maiz y piensos para animales.

  9. Hola,
    Estoy interesada en la determinación de N total en muestras de musgos, es necesario realizar un pre-tratamiento (¿meter musgo en la estufa para perder humedad?) antes de la digestión o se puede digerir directamente.
    Saludos
    Angeles

    • Apreciada Angeles
      Se hace la digestión directamente.
      Si el contenido de humedad es muy elevado, se puede programar un tiempo de digestión algo mayor para el primer paso (aprox 150ºC entre 20 y 60 minutos en función de la humedad de la muestra).
      Saludos

  10. Ante todo muchas gracias por la publicación de esta página y facilitar el trabajo diario de laboratorio.
    Mi pregunta es la siguiente:
    Como puedo controlar la temperatura que se alcanza en la digestión?
    Puede ser que por un exceso de temperatura o tiempo las proteínas se “quemen”.
    Saludos

    • Apreciado Fernando
      La temperatura alcanzada por la digestión está controlada por el regulador del bloque digestor.
      Si lo que desea es medir qué temperatura alcanza una muestra cuando se realiza la digestión, es muy difícil ya que significaría introducir una sonda en ácido sulfúrico 98% a una temperatura aproximada de 400 ºC. No conocemos ningún tipo de sonda que resista estas condiciones.
      Por otro lado, se podría intentar mediante un termómetro de infrarrojos pero también resultaría poco fiable y peligroso.
      Si lo que desea es validar el proceso, es mejor validarlo con un patrón de acetanilida. De esta manera tenemos la seguridad de que en todo momento se cumplen las condiciones necesarias para una digestión completa.
      Por otro lado, el exceso de tiempo o de temperatura no destruye las proteínas.
      Si lo que encuentra es una falta de recuperación de proteína después del proceso completo puede ser por una digestión incompleta (falta tiempo o temperatura en la digestión) o por una insuficiente adicción de NaOH en la destilación.
      Saludos

  11. Ante todo gracias por la respuesta. Mi problema es en la harina de pescado, a veces al momento de la destilación, al verter el NaOH al 40%, toma una coloracion azulada y otras marrón casi color carbonizado, oscuro… a qué se debe que en algunas ocaciones toma diferentes coloraciones?… Muchas gracias por su invalorable ayuda. Atte L. Rios

    • Apreciado Luis
      El color azul o marrón oscuro depende de la cantidad de NaOH que añadimos a las muestra para iniciar la destilación.
      El color azul nos garantiza que hemos puesto exceso de NaOH en la muestra para neutralizar todo el ácido sulfúrico que ha quedado después de la digestión y para que reaccione con el amonio sulfato que se ha formado en ésta.
      Cuando no se alcanza este color azul y la muestra queda de color marrón, no tenemos esta garantía aunque es posible que sí haya exceso de NaOH y el resultado del análisis sea correcto.

      ¿A qué se debe que en unas muestras si se alcance el color azul y en otras no?
      Fundamentalmente a que:
      1.- No todas las muestras tienen la misma cantidad de proteínas. Muestras con diferente cantidad de proteínas “consumen” un volumen diferente de ácido sulfúrico durante la digestión.
      2.- Normalmente el ácido sulfúrico que ponemos en un tubo de muestra para la digestión se añade con poca precisión ( y no es necesaria). Puede haber diferencias de 1 o 2 ml entre muestra y muestra y esta diferencia puede provocar la diferencia de color en el momento de la destilación.

      Si desea tener la seguridad de que añade exceso de NaOH, una vez iniciada la destilación si la muestra en concreto no alcanza el color azul, puede añadir más cantidad de NaOH. En el Pronitro M, por ejemplo pulsando la tecla de flecha abajo para añadir 20 ml más.
      Otra opción es programar un volumen inicial mayor.

      De todas formas, como le decía anteriormente, no es imprescindible alcanzar este color azul. Con un cálculo estequiométrico puede determinar la cantidad de NaOH que necesita y programarla en el equipo. De esta manera sabrá que la cantidad añadida es suficiente independientemente del color final de la muestra.

      Saludos

  12. Buenos días.
    Este método de análisis es selectivo para todo tipo de alimentos? He obtenido resultados muy elevados de proteína en edulcorantes de mesa, estos contienen nitrógeno pero no son de origen proteico, tipo sacarina ácida, existe algún método de análisis para cuantificar proteínas en este tipo de alimentos?
    Un saludo y gracias

    • Buenos días, Alfonso.
      En primer lugar, disculpa el retraso en responderte.
      No tenemos experiencia en análisis de edulcorantes y aunque hemos consultado con laboratorios que colaboran con nosotros, ninguno nos han sabido dar una respuesta definitiva sobre la cuestión que nos planteas, ya que tampoco analizan este tipo de muestras.
      Lamentamos mucho no poder ayudarte.
      Recibe un cordial saludo

  13. lo maximo esta informacion me sirvio muchisimo en la elavoracion de mi informe de practica,muchas gracias…..

  14. Buenas tardes:
    Tengo una inquietud,en la determinación de proteíonas cambie las pastillas catalizadoras antes usaba sulfatos con selenio y ahora las uso sin selenio, sin embargo todo me modifico, la digestión no queda traslucida sino como pastosa y al titular me dan valores mayores a lo normal, que puede estar afectando el proceso, los demás reactivos son los mismos.

    • Buenos días, Rocio
      Si cambia de catalizador, tiene que reajustar el proceso.
      El catalizador modifica propiedades de los reactivos y cada catalizador lo hace de manera diferente.
      Por los datos que nos envía parece que la digestión no es completa.
      Debería probar a aumentar la cantidad de sulfúrico que utiliza en cada muestra o a aumentar el tiempo de digestión.
      Una de estás dos propuestas tendría que solucionar el problema.
      Por ejemplo: si utiliza catalizador de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) debe poner para 15 ml de ácido sulfúrico 98%, 8 gramos de catalizador y el último paso de la digestión debería durar al menos 1h.
      Recibe un cordial saludo

  15. Si utilizo sulfato de potasio y sulfato de cobre pentahidratado, en que cantidades deberia anadir cada uno de estos reactivos para0.5 g de muestra y 15 mL de acido sulfuric? Como puedo asegurar que la cantidad de los mismos es la correcta/

  16. muy bueno artículo, me gustaria que me enviaran el metodo para determinacion de amonio por arrastre de vapor, muchas gracias

  17. estoy trabajando con una muestra de maiz pero he tenido problemas en alcancar la coloracion verdosca tranparente en la etapa de degistion a que se debe esto ,

    • Buenos días, Francisco
      El problema puede ser debido a:
      1.- Insuficiente ácido sulfúrico 98% para realizar la digestión completa (o exceso de muestra).
      2.- Tiempo de digestión insuficiente.
      3.- Temperatura insuficiente en el último paso de la digestión.

      Otra causa no tan probable:
      4.- Exceso de catalizador

      Un saludo

  18. hola excelente trabajo .. ..bueno he utilizado este método , pero la verdad nuestro profesor nos ha dado un cuestionario en donde nos habla de sustancias a utilizar en un ensayo en blanco y no se que hacer estuve investigando y no doy con la respuesta y necesito ayuda por que estoy en cero …:(

    • Buenos días,
      Normalmente, para un ensayo en blanco se utiliza agua destilada.
      El resultado debe ser muy próximo a cero y nos da una idea del grado de contaminación que tenemos en nuestros reactivos.
      Un saludo

  19. que diferencia tengo entre una muestra liquida y otra seca?????? un concentrado por ejemplo.
    gracias

  20. Buenas, primero felicitar por el muy buen material que subieron a esta pagina, es de mucha ayuda.
    Lo segundo es una consulta que tengo para hacerles. Estoy utilizando uno de sus equipos, un bloc digest para 6 tubos, para la determinación de proteínas de harina de carne y hueso. En general no llegamos a completar 6 muestras por día para tirar (lo usual es que tiremos 4), por lo que nos quedan casi siempre 2 o más tubos sin contenido. Mi pregunta es si el dejar los tubos vacíos durante la digestión me puede generar algún problema tanto para el equipo como para el resultado final de proteína.
    Muchas gracias.
    Saludos.

    • Buenas tardes
      No hay ningún inconveniente. Pero los tubos deben estar vacíos o con ácido. Nunca con agua u otro líquido cuyo punto de ebullición sea inferior al del ácido sulfúrico.
      Saludos.

  21. Muy buena informacion y muy bien explicado, me ayuda bastante porque tengo que poner a punto un semiautomatico, me saco varias dudas. gracias

  22. Buena informaciòn . pero ahora quiero saber cuales otros factores puedo usar para estimación de proteinas : y para muestras especificas como :frijol, trigo, maiz, leche, carne de ave y huevo??? les agradeceria que me informaran… gracias

  23. Hola,

    como hago para verificar y eliminar:
    - Perdida de amoníaco por fugas en el circuito de destilación.
    - Perdida de amoniaco por refrigeración insuficiente en el condensador.
    Muchas gracias, saludos

    • Buenos días,

      Para comprobar fugas en el circuito de destilación debería retirar las tapas laterales del equipo y simplemente observar si hay salida de vapor en algún punto del circuito.
      Respecto a la refrigeración insuficiente debería comprobar que el destilado tiene una temperatura inferior a 20 ºC en otro caso es probable que se produzcan pérdidas.
      Si con estas dos comprobaciones no consigue detectar la causa de las pérdidas debería ponerse en contacto con un servicio técnico de Selecta.

      Saludos.

      Admin.

  24. Quiero saber cual es el valorde la avena de la tabla de kjendalh

  25. Disculpa, como se obtiene el factor de convercion de 6.25

  26. que diferencia hay entre la proteína en base seca y en base humeda??, como corrigo mi resultado de una harina de humedad 13.5 a estándar 14, o un trigo de humedad 9.95 a la estándar 12

    • Buenos días

      No sé si he entendido muy bien la pregunta que plantea. Si se refiere a la diferencia entre una misma muestra con diferente tipo de humedad, debe tener en cuenta que en el momento de pesar la muestra está pesando el extracto seco y la humedad.
      Si trabaja siempre con extracto seco podrá compararlas.
      Si no le es posible trabajar con extracto seco puede calcular el % de proteína sobre el extracto seco a partir del % obtenido con la muestra húmeda ( ya que como me parece observar en su pregunta conoce la humedad de cada muestra) Y compararlo una vez haya calculado el % sobre extracto seco.
      Yo le haría una pregunta, ¿Necesita conocer el % de proteína de una muestra que tenga siempre el mismo grado humedad?

      Saludos.

      Admin.

  27. Gracias por la ayuda, quiero que sepan que me ha ayudado a entender los cálculos y que nadie ha sabido explicarme.

  28. hola mi nombre es ferney
    por favor podrian ayudarme con el peso de las diferentes muestras a analizar
    por ejemplo para frutas, cereales, granos, hortalisas, alimento animal entre otros.
    muchas gracias
    espero su colaboracion.

    • Buenos días Ferney. Aconsejamos utilizar alrededor de 1 g (1000 mg) de muestra. Solamente deberías reducirla en caso de que el contenido en nitrógeno sea muy elevado para evitar un consumo excesivo de ácido de valoración. Si trabajas con un Pronitro A lo ideal es que el consumo de ácido esté entre 6 y 15 ml así que las muestras deben tener una cantidad de nitrógeno que puedan ser valoradas con estos volúmenes.
      Te pongo algún ejemplo con patrón de sulfato de amonio:

      Normalidad del ácido de valoración Muestra de sulfato de amonio.
      0,05 20 … 40 mg sulfato de amonio (4.24 – 8.48 mg Nitrógeno)
      0,1 40 … 90 mg sulfato de amonio (8.48 – 19.08 mg Nitrógeno)
      0,25 100… 200mg sulfato de amonio (21.20 – 42.40 mg Nitrógeno)
      0,5 200… 400mg sulfato de amonio (42.40 – 84.80 mg Nitrógeno)

      Deberías aplicar el mismo criterio a tus muestras.

      Saludos.

      Admin.

  29. buen dia
    gracias por la respuesta, pero esto que me dices no importa si es para cualquier otra matriz, supongamos que voy a realizar el montaje para 5 muestras y una es de una leche, otra de un yogurt, una fruta, carnicos y un concentrado para ganado.

    segun lo que me dices es que en las 5 muestras debo pesar el mismo gramo para todas??
    gracias

    • Buenos días.

      No, creo que no me he explicado bien, lo que quiero decir es que para cada tipo de muestra es mejor pesar la cantidad adecuada para esa muestra.
      Imagina que tuvieras una muestra, A con un 50% de nitrógeno y otra, B con un 5% Si pesas 500 mg de cada muestra en el caso de la A obtendrás 250 mg de nitrógeno y en el de la B 25 mg. Puedes trabajar perfectamente con estas cantidades pero en el momento de la valoración y con un reactivo de valoración 0.25 N gastarás del orden de 70 ml en el caso de la A y 7 ml en el de la B . Por eso conviene adecuar el peso al tipo de muestra.

      Por ejemplo de la A 100 mg (obtendrás unos 50 mg de nitrógeno) de la B 1000 mg (obtendrás unos 50 mg de nitrógeno) el consumo en la valoración sería similar , del orden de unos 14 ml.

      Saludos.

      Admin.

  30. cordial saludo
    necesito validar este metodo y no se como hacerlo me podrias ayudar con esto??

  31. buen dia
    el patron que se usa es sulfato de amonio
    de este necesito preparar una solucion de que concentracion me recomienda?
    o se puede agregar en polvo directamente el reactivo.

  32. Hola

    Estoy usando un sistema micro. En la etapa de digestión, 10 ml de ácido sulfúrico concentrado , 1.5 g del catalizador y 0.50 g de muestra. Apago el digestor cuando observo un color verde oscuro en los tubos. A continuación, al destilador, le añado 10 ml de agua destilada e NaOH pero no se observa el color marrón. Se añade más NaOH?

    • Buenos días Andrea.

      Si, efectivamente, parece que debes añadir más NaOH. Para que aparezca el color marro al que haces referencia la HaOH debe estar en exceso con respecto al sulfúrico que ha sobrado de la digestión. Probablemente también observarás que no recuperas nada de nitrógeno.

      Saludos.

      Admin.

  33. Estimados, en nuestro laboratorio usamos como catalizador 7g de sulfato de potasio con 0.8g de sulfato de cobre. Es bueno este tipo de catalizador o nos recomiendan otra combinación de reactivos?

    • Buenos días.
      No tenemos experiencia sobre la combinación que están utilizando pero podría ser perfectamente válida.
      Nosotros recomendamos en nuestro manual Catalizador Kjeldahl (Cu) (6.25% en CuSO4.5H2O) Que tiene una combinación muy similar a la que utilizan.
      De cualquier manera si obtienen buenos resultados en sus análisis no deberían cambiarla.

      Saludos.

      Admin.

  34. hola, estoy realizando mi tesis y necesito calcular las proteinas de la leche en polvo que obtengo despues se secar por aspersion, lo que pasa es que el volumen del acido clorhidrico que se gasta es muy pequeño y el contenido de nitrogeno me da muy bajo, la normalidad del acido es de 0.1

    • Buenos días.
      En principio debería asegurarse de que los equipos utilizados funcionan correctamente realizando las pruebas de recuperación con Acetanilida y Amonio Sulfato.
      Si todo es correcto, revisar la cantidad de NaOH añadida en la destilación. Si comprueba que la cantidad añadida es suficiente revisar el proceso de digestión.

      Saludos.

      Admin.

  35. Excelente pagina, sigan así es de mucha ayuda para los que estudiamos físico-química !!!

  36. Hola , quisiera saber por que se me produce una reaccion violenta durante la destilación, estoy determinando N en fertilizante UREA, pienso que estoy agregando demasiado NaOH (100 ml al 50 % p/v) o no estoy agregando suficientes perlas de vidrio (agruegue 30 )

    Gracias

    • Buenos días. El NaOH que agregas en la destilación tiene que estar en exceso. Podrías hacer un cáculo estequiométrico para saber aproximadamente cuanto necesitas en función de la cantidad de ácido sulfúrico que añades para la digestión.
      Por otro lado, después de la digestión se añade agua a las muestras digeridas, esto diluye el resto de ácido sulfúrico de la digestión. Es posible que añadas poca y por esta razón la reacción es tan violenta cuando añades el NaOH en la destilación.

      Saludos.

  37. Excelente pagina, los comentarios y respuestas son muy validas. Tengo una interrogante, un método Kjeldahl usa blanco y la titulación con NaOH 0.1 N, recibe el amoniaco en 50 mL de ácido clorhidrico 0.1 N. El volumen del blanco es mayor que de la muestra y me parece raro. Ademas las muestras son concentradas de frijol y los valores obtenidos son menores a las determinadas por otro laboratorio.

    • Hola buenas tardes.
      No tenemos demasiados datos para contestar la pregunta. Lo que está claro es que el blanco debería ser inferior a la muestra. De hecho el resultado de la muestra debería ser la suma de el valor real más el blanco.
      Si el valor del blanco es superior probablemente hay algún error en el procedimiento.
      Si nos proporciona más datos sobre el procedimiento intentaremos ayudarle.

      Saludos.

  38. Buen dia, me facilitan un correo para solicitar presupuesto de dicho equipo, desde ya gracias.

  39. Saludos, al momento de enfriar las muestras despues de la digestion para proceder a destilar, estas se gelatinizan, cual es el motivo? Estoy determinando proteina el leche en un micro kjeldahl, usando 3ml d muestra, 10ml de H2SO4, 1 tableta catalizadora, 5gr de potasio sulfato y perlas de ebullición, con 3 rampas de 150 C por 120 minutos, 270C por 60 minutos y 400C por 60 minutos, ademas al momento de la destilación, que cantidad de NaOH, y H2O me recomiendan dispensar, asi mismo que tiempo para la destilación, a la espera de sus comentarios

  40. Buenas,

    Cuando calculo el % de recuperación

    Como me aseguro que la Acetanilida 100 % pura ?

    Lo mismo para el SO4(NH4)2

    Muchas Gracias

    • Buenos días.
      Normalmente tanto la acetanilida como el amonio sulfato no son puros al 100%.
      Lo que ocurre es que la aproximación es válida ya que su pureza, si se compran éstos reactivos para usarlos como patrones, suele ser superior al 99.5 %.
      En todo caso si desea hacer un cálculo más exacto, en la etiqueta del reactivo, indica la riqueza mínima y con ella calcular la incertidumbre del resultado obtenido en sus pruebas.
      Saludos

  41. Buenos días, buena información. Lo que deseo saber es el tratamiento preliminar de la muestra en caso de que se trate de material vegetal como por ejemplo la alfalfa. Desde ya muchas gracias.

    • Pienso que Conviene antes determinar la humedad de la muestra para poder luego expresar los resultados analíticos sobre la base de la materia seca.

      Saludos

    • Buenos días. En principio no hay ningún tipo de tratamiento preliminar para muestras vegetales. En todo caso, para un tipo de muestra concreta, debería consultar si hay alguna norma que aplique y si en ella se hace referencia a algún tratamiento.

      Saludos.

  42. Buen día

    Durante la destilación a través de un equipo tradicional Kjedahl por que cuando neutralizas y los primero minutos burbujea NH3 en la solucion de acido borico y despues cuando ya levanto temperatura cae NH3 liquido en la solucion de acido borico. Muchas gracias

  43. hola acabo de hacer una practica de determinacion de proteinas en la leche por el metodo de kjedhal y el resultado que obtuve yo al hacer los calculos con unas formulas que nos dio la maestra es muy alegado del resultado que deberian tener……..creo deberia de haber salido un valor cercano a 3.2% y yo obtuve 7.82%…. creo que hice algo mal
    los datos son los siguientes:
    el volumen de muestra fue 10 ml, el volumen del blanco fue 1ml, se utilizo HCl 0.1 N para titular, la muestra en gramos son aprox 10.32 g, el volumen de HCl consumido fue 1.1 ml, el factor de la leche es 6.38
    podrias decirme como se hacen los calculos correctamenrte

  44. muy bueno gracias !!

  45. Buenas tardes,

    Me realizaron unas evaluaciones del contenido de proteína en pectina de nopal y resultaron muy altas del 30% cuando deberían ser del 3 %. Al analizar la formula para determinar el % de N, utilizaron un peso equivalente del N de 14, para una muestra en gramos, no se si se tenga que aplicar un peso equivalente de 1.4007 como en algunos casos que he revisado.

  46. Estimados, Buenas Tardes!
    Por favor me podrían ayudar con la información sobre que proveedor ofrece en Bolivia los 2 reactivos (amonio sulfato y acetanilida).
    Por otro lado cuales serian las características de cada reactivo, como ser: la calidad de pureza que debe tener, si es grado p.a. o comercial, etc.

    Por favor necesito su ayuda, porque necesito validar el método para determinar la proteína.
    Saludos

    • Buenos días .
      Sentimos no poder ayudarle. Desconocemos los proveedores de reactivos de Bolivia.
      Sin embargo son dos reactivos muy usuales y a parte de la marca Panreac que nosotros referenciamos podrá encontrarlos de otras marcas .
      Con respecto a la pureza debe ser para análisis ya que comercial podría contener impurezas que interfieran en los resultados.
      Saludos”

      • Muchas gracias por su respuesta.

        Pero realizando los ensayos me surgieron las siguientes interrogantes:
        - Para una muestra de 0.5gramos de harina de soya, cuanto de ácido sulfúrico al 97%, debería adicionar para tener una buena digestión?. Nosotros en base a como venían trabajando adicionamos 10ml y para grano de soya 1 gramos de muestra y 15ml de ácido. Estaría bien el volumen de ácido sulfúrico para el peso de las muestras?
        - En la etapa de destilación utilizamos el Hidróxido de sodio a 40ºBe; la pregunta es: si da lo mismo utilizar 40ºBe o 40 % NaOH?. Al variar la concentración del NaOH a 32% afectaría al resultado final?
        - Para calcular el porcentaje de la proteína, por el método determinamos un blanco y para el cálculo final restamos el volumen gastado de HCl 0.1N en el blanco al volumen gastado en la muestra. La pregunta es: si está bien restar el volumen del blanco o debemos sumar el volumen del blanco al volumen de la muestra?.
        De antemano estoy muy agradecida.
        Saludos

        • Buenos días,

          Con respecto a la cantidad de Ácido sulfúrico pensamos que es correcta.

          Con respecto a la concentración de NaOH que utilizan en la destilación pueden utilizar la que deseen teniendo en cuenta que el volumen que deben añadir tiene que ser suficiente para neutralizar el resto de ácido sulfúrico de la digestión y estar en exceso para reaccionar con el sulfato de amonio que se ha formado. Por lo tanto, si por ejemplo necesitan 30 ml de NaOH 40 % y quieren utilizar NaOH 30% deberán añadir una cantidad superior. Con un cálculo estequiométrico podrían calcular la cantidad exacta.

          Con respecto al cálculo de la proteína, es correcto restar el volumen gastado en el blanco. Éste volumen es el necesario para neutralizar las “impurezas” de los reactivos. Cuando valoran una muestra están valorando el nitrógeno de la muestra junto con las impurezas de los reactivos.

          Saludos

          • Buenos Días!
            primeramente agradecerle muchísimo por su ayuda incondicional.
            Como segundo, comentarle que ya me llego los 2 reactivos (amonio sulfato y acetanilida).
            Ahora me piden hacer la razón de recuperación en todas las etapas con acetanilida y con sulfato de amonio en la destilación.
            Donde me nacen las siguientes interrogantes para realizar el ensayo:
            1.- Que cantidad de masa de acetanilida para una verificación completa?
            2.- Qué cantidad de sulfato de amonio debería pesar para verificar la etapa de destilación?
            3.- El sulfato de amonio se debe disolver con agua destilada antes de colocar al destilador en el mismo tubo macro o en otro recipiente, si es así que cantidad agua se requiere para disolver?

            Mencionarle que para la valoración nosotros utilizamos HCl de concentración 0.1N.

            Sin mas que agregar, me despido muy agradecida por el apoyo brindado.
            saludos.

          • Buenos días. Nosotros aconsejamos estos valores pero se puede hacer poniendo patrones cuya cantidad de nitrógeno se asemeje lo mas posibles al tipo de muestra si es que lo conoce.
            Normalidad – Muestra de sulfato de amonio.
            0,05 – 20 … 40 mg
            0,1 – 40 … 90 mg
            0,25 – 100… 200mg
            0,5 – 200… 400mg
            Para la acetanilidad las cantidades que contengan aproximadamente el mismo nitrógeno.
            El agua en que diluimos al sulfato de amonio se debe añadir en el tubo de destilación para evitar pérdidas.

            Saludos.

  47. Muy buen trabajo,
    Como puedo saber cuanta muestra utilizar de queso:
    La tecnica semi-micro kijeldahl está diseñada para determinar 2 a 3 g de nitrógeno; para cumplir con esta condición; ¿Cuanto deberá pesarse de una muestra de queso si se supone que la misma tiene alrededor de 28% de proteina?

    • Buenos días.

      Supongamos que utiliza un factor (F) de 6.25 para el cálculo de la proteína.
      Si su muestra tiene un 28% de proteína (P) tenemos %P = F x % N Si ahora aislamos el % de nitrógeno % N = %P / F es decir %N = 28 / 6.25. %N = 4.48 % N
      Así sus muestra tiene un 4.48% de nitrógeno. Es decir 100 mg de muestra tendrá 4.48 mg de nitrógeno.
      Saludos

  48. Me ayudó mucho…

    Tengo %humedad =10%, %Ps = 8.61, muestra=2000mg, HCl=21.1ml 0.1N; si le cambio a 35% de humedad, como se cuanto HCl voy a necesitar?

    • Buenos días Ximena.

      No entendemos muy bien la pregunta. ¿Podría plantearla con un poco más de detalles por favor?

      Saludos.

      Admin

  49. Hola muy buen día!
    ¿Quisiera saber si me podrían ayudar?
    Tengo ciertos problemas al desarrollar el análisis de mis muestras, ya que si bien los resultados que estoy obteniendo no corresponde a los teóricos y no se que es lo que me puede estar afectando.
    Dependiendo de la muestra peso la cantidad de muestra necesaria, le agrego un cuarto de pastilla de catalizador, alrededor de 12-15mL de ácido sulfúrico y procedo con la digestión, el residuo de la digestión posee un color verdoso claro similar al de la pastilla de catalización, posteriormente le hago la digestión y para ello empleo 70mL de NaOH al 35%, y como valorante estoy utilizando ácido sulfúrico 0,02N (estandarizado) y empleo la mezcla rojo de metilo y azul de metileno como indicador (el cambio del viraje es claro y fácilmente detectable).
    Pues si bien monte un patrón de acetanilida siguiendo sus lineamientos y mi porcentaje de recuperación fue del 10% y no se que pueda estar fallando que me esta afectando mis análisis.
    De antemano les agradezco mucho su ayuda!

    • Buenos días.
      En primer lugar le aconsejamos que realice la prueba de recuperación con sulfato de amonio para verificar el funcionamiento del destilador y el valorador. Una vez comprobado, si los resultados siguen siendo incorrectos, envíenos los valores de peso de acetanilida y volumen de sulfúrico consumido en la valoración.
      Saludos

  50. Buen dia,

    Quisiera consultar como saber hasta cuanto NaOH hay que agregar para neutralizar antes de destilar. La digestión la realizo con 20 ml de ácido sulfúrico y la neutralizacion con NaOH al 45 % , Gracias

    • Hola , para estar seguro de que añade la suficiente NaOH sólo tiene que hacer un cálculo estequiométrico.
      Parte de 20 ml de H2SO4 de riqueza R % y densidad DH g/ml
      MM H2SO4 = 98.08 g/mol
      MM NaOH = 40.00 g/mol
      NaOH 45 %
      Desnsidad del NaOH 45 % = DNa g/ml

      20 x DH = gramos de solución H2SO4 que quieres neutralizar = G0
      G0 x R = Gramos de H2SO4 que queremos neutralizar = GH
      GH x 98.08 = Moles de H2SO4 que queremos neutralizar = MH
      Ahora:
      H2SO4 + 2 NaOH < => 2 H2O + Na2SO4
      Por lo tanto necesitamos 2 moles de NaOH para neutralizar un mol de H2SO4.
      2 x MH = Moles de NaOH que necesitamos = MNa
      MNa / 40.00 = Gramos de NaOH que necesitamos = GNa
      GNa / 45 = Gramos de solución NaOH al 45 % que necesitamos = G1
      G1 / DNa = Volumen de disolución NaOH 45% que necesitamos.

      Saludos

      • Muchas Gracias

      • para calculare los moles de acido sulfurico no hay que dividir los gramos de acido sulfurico por 98,08 ?

        Gracias

        • “Buenos días.
          Pues no lo sabemos, tendría que ser más especifico. ¿Se trata de calcular el número de moles a partir de una disolución?
          ¿Está hablando de riqueza o de normalidad?…

          Si a lo que se refiere es a calcular el nº de moles a partir de la masa molecular del ácido sulfúrico, efectivamente.
          La masa molecular es 98,079 g/mol.
          Saludos”

  51. Buenos días;
    Quisiera ver si me pueden ayudar con una consulta.
    Durante la destilación tengo el problema de que parte del ácido bórico contenido en el erlenmeyer receptor, se proyecta hacia el balón, (como si el balón succionase el ácido), estropeando todo el ensayo. Cual puede ser el motivo?
    Gracias

    • Hola
      Podría ser debido a que en algún momento se interrumpe la generación de vapor y al enfriarse el generador de vapor hace el vacio succionando el bórico.
      De todas formas necesitaríamos más información sobre el equipo de destilación que utiliza para poder determinar dónde está el problema.
      Saludos

      • Hola;
        Ante todo, muchas gracias por responder.
        Estoy trabajando con un equipo macro tradicional. Los balones los coloco en mantas calefactoras para realizar la destilación y estos están conectados al condensador. Caliento las mantas antes de colocar los balones, y los mismos los coloco a temp ambiente. (También he probado comenzar con las mantas frías). En ningún momento interrumpo el calentamiento. Ya no se que mas probar.

        • Hola Buenos días.
          Pues si es así no se que decirle. Todo indica a que por alguna razón, el contenido del balón pierde temperatura, se hace el vacío en él y absorbe el ácido bórico del erlenmeyer pero no sabemos a que es debido.
          Siento que no podamos ayudarle más.

          Saludos.

  52. Buen día!!

    Mi duda es ¿Las muestras a analizar se deberán desengrasar previamente para realizar la determinación de proteínas? Si o no y ¿por qué? o ¿sólo determinar su humedad?

    Manejaré frijol, soya, arroz integral y lenteja.

    saludos.

    • Hola Buenos días.
      No, en principio no se debe estraer la grasa ni tampoco la humedad. Sencillamente pesar la muestra y pasar al proceso de digestión. Este proceso tendrá diferentes tiempos y diferentes temperaturas que dependerán del tipo de muestra. El agua (humedad) y la grasa se eliminan en este proceso .

      ¿Por qué? Porque queremos saber la cantidad de proteína sobre el producto sin tratar. Si extraemos primero la humedad y después pesamos tendríamos la proteína sobre el producto seco.

      Saludos

  53. Hola disculpe es un buen trabajo pero si usamos la muestra del cacahuate (Maní) como seria la formula… y el valor de las proteínas

  54. Hola buenos días. La formula seria la misma. El factor de proteínas es 6.25 para alimentos en general. Por lo que tenemos entendido para cacahuetes seria 5.41.

    Saludos.

    • Hola buenos días. La formula seria la misma. El factor de proteínas es 6.25 para alimentos en general. Por lo que tenemos entendido para cacahuetes seria 5.41.
      Saludos.

  55. Hola buenos días: estoy utilizando tubos de ensayos de 100 ml para los procesos de digestión. Las muestras son de 3 g y el gramaje del catalizador es de 1 g, al terminar el proceso de digestión obtengo muestras de color azul/celeste muy claro.
    Mi problema es en la destilación en donde utilizo un indicador mixto de verde bromocresol y rojo de metilo al 0.2% en relacion 5:1. Al matraz Enlenmeyer le agrego 20 ml de ácido bórico y 5 gotas del indicador, la muestra adquiere un color rojo claro y al introducirlo en el vapodest 20s se deberia tornar a un color turquesa pero queda del mismo color rojo claro….¿cual seria el problema?

    • Hola buenos días. Parece que no consigue extraer el nitrógeno de la muestra. Podría ser por la cantidad de NaOH que añade en la destilación. Le aconsejamos que pruebe a hacer una destilación con un patrón , por ejemplo amonio sulfato. Si todo va bien, cuando realice una muestra, añada más cantidad de NaOH.
      Para saber si el NaOH está en exceso (necesario para que el análisis funcione), calcule la cantidad necesaria para neutralizar el ácido sulfúrico que añadió para la digestión y añada 10 ml más de esa cantidad en la destilación.

      Saludos

  56. Hola buenos dias. Estamos utilizando vuestro equipo Kjedldahl, con excelentes resultados para harina de garrofin. Hasta ahora hemos usado una pastilla catalizadora de 3.6g de 95.2% de K2SO4 y 4.8% HgO de Panreac. Este catalizador ya no se fabrica y pensábamos usar el que nos recomendais 8g de 6.25%Cu.

    Nos va a afectar el cambio en el proceso de digestión?

    Saludos

    • Hola buenos días.

      En principio no debería afectar. Únicamente tener en cuenta que las cantidades que se deben añadir son diferentes. Está especificada en el manual de usuario
      .
      Saludos.

  57. realizando la verificación con un patrón de glicina, obtuvimos una recuperación de nitrógeno muy alta… Que pudo pasar??
    Saludos.

    • Hola buenos días.
      Normalmente, una alta recuperación es debida a contaminación de los reactivos, normalidad del ácido utilizado errónea o un error de cálculo

      Saludos.

  58. Saludos

    Primero que todo gracias por la información, es muy completa y de gran ayuda.

    Yo tengo que realizar el método de Kjeldahl para cuantificar proteínas en un caldo, pero tengo problema de que al ser líquido pues quizás deba modificarlo con la adición de una columna para recuperar los compuestos nitrogenados y luego continuar como dicta el proceso.

    Aun no lo he realizado***

    Alguna sugerencia adicional?

    • Hola Mara.

      No tenemos constancia de que exista una norma específica para determinación de proteínas en sopa. Si fuera así deberías seguir esta norma.
      Si no es así, en principio el proceso es el mismo que para cualquier otra muestra. Ten en cuenta que al ser líquido el primer paso de la digestión destinado a evaporar el agua de las muestras tendría que ser algo más largo. En nuestra web en general ponemos:

      1. En función del contenido de agua de la muestra, empezar la digestión evaporando agua a 150ºC entre 15 y 30 minutos.
      Para una muestra de 100 ml podría poner 60-90 minutos por ejemplo.

      A parte de eso el mismo proceso como le comentaba.

      Saludos

  59. si el factor de conversión de nitrógeno a proteina es 6.25 en soya es 5.71

  60. Buenas Tardes: ADMIN

    Para sacar un resultado rápido de proteína: puedo utilizar lo siguiente, humedad del trigo
    por factor 0.865.- Esto es para obtener un resultado aprox. hasta analizar.- Es posible??

    • Hola buenas tardes.
      Sentimos mucho no poder ayudarte pero desconocemos si existe algún tipo de aproximación como ésta a la que haces referencia.

      Saludos.

  61. hola buenas tardes. Quiero felicitarlos por la información aquí publicada, está muy completa y muy bien explicada.

    Con base en esta información necesito analizar 3 aspectos

    1. ¿puedo determinar el N en urea con este método?
    2. ¿porque este método no identifica el N proveniente del NO3?
    3. desde el punto de vista nutricional, ¿porque la información obtenida con este metodo es mas efectiva para rumiantes que para monogastricos?

    Espero que me puedan ayudar, Gracias.

    • “Hola buenos días.
      Sí, se puede utilizar este método par la determinación de N en urea.
      Con respecto a la segunda pregunta, tanto nitritos como nitratos no forman amonio sulfato durante el proceso de digestión y por lo tanto no se determinan en la posterior destilación.
      A la tercera pregunta no sabemos responderte.
      Saludos”

  62. Hola.
    Estoy haciendo un analisis de contenido de proteinas mediante el metodo kjendal, pero mis muestras (aislado proteico) se queman, se tornan de color negro. Utilizo la muestra (0.3 g), mezcla catalizadora (1.5 g) y acido sulfurico (3.5 mL). Espero su respuesta. Gracias

  63. Hola, descubri esta pagina y la encontré genial muy explicativa me gusto mucho.
    Estoy determinando proteína en leche en polvo, sueros lácteos y sustitutos lácteos; en los ultimos analisis mis resultados han sido menor a lo esperado. Utilizó un catalizador preparado en una relación de 1:10. Mi consulta es si los lácteos tienen un tiempo mayor de digestión que el resto de los alimentos ; el tiempo que utilizo es de 4 hrs y cuales pueden ser mis puntos críticos con esta matriz?? Afecta la humedad de la muestra como para trabajarla en base seca??’

    • “Hola buenos días. Por lo que entendemos han tenido buenos resultados hasta ahora y en los últimos han empezado a notar menor recuperación.
      No parece que sea un problema del protocolo que utilizan ya que si hasta ahora había ido bien…
      Creemos que deberías revisar los reactivos que utilizas, que no estén contaminados, que las concentraciones sean correctas,… un pequeño error en la concentración del ácido de valoración puede provocar este tipo de “perdidas”.
      Y comprobar que el equipo de destilación no tiene fugas. Esto lo pueden hacer utilizando un patrón de sulfato de amonio por ejemplo.

      Con respecto a los tiempos de digestión, probablemente los lácteos necesiten un tiempo más largo que un cereal pero más corto que una carne. De cualquier manera, como decíamos al principio si con el protocolo utilizado hasta ahora había obtenido buenos resultados le aconsejamos que busque la fuente de las perdidas en otras partes del proceso.
      Y respecto a la humedad de las muestra, para la digestión es imprescindible eliminar completamente toda el agua , por eso aconsejamos en el proceso de digestión un primer paso entre 150 – 165 ºC (en nuestros equipos en otros tal vez sean diferentes)
      Cuando continuamos con el proceso, si la muestra aun contiene agua, al intentar elevar la temperatura se suelen producir pequeñas explosiones y ebulliciones violentas que pueden causar errores en la determinación.

      En resumen, si hasta ahora con el protocolo que utilizaban obtenían buenos resultados debería buscar el origen de estás perdidas en algún reactivo o en un fallo del equipo de destilación.
      Saludos”

      • Hola Buenos dias, gracias por tu pronta respuesta.
        Hoy comenzaré a trabajar verificando mis reactivos y equipos para ver donde se encuentra mi fuga.quería hacer otra consulta para la titulación estoy utilizando Hcl 0.2 N, el lo preparo y lo estandarizo con Na2CO3; puedo usar Ác. sulfúrico 0.1 N titripac el cual ya viene estandarizado y asi tener su normalidad mas certera o su composición diferente afectaría mis resultados??Desde ya muchas gracias!!!!!

        • “Hola buenos días.
          Por supuesto que puede utilizar este reactivo. De echo nosotros aconsejamos utilizar todos los reactivos estandarizados hasta conseguir resultados correctos para descartar posibles errores en su preparación.
          Por otro lado puede utilizar tanto Ácido Sulfúrico como Clohídrico de la normalidad que mejor se adapte al proceso que realiza. El resultado de la valoración será el mismo. Sólo tiene que tener en cuenta la normalidad utilizada a la hora de realizar los cálculos.
          Saludos”

    • Buenos días; estaba leyendo que hacen determinación de proteínas en lácteos y derivados. Quisiera saber si podrían facilitarme algunos datos como cantidad de muestra que utilizan de suero en polvo, wpc o concentrado de proteína en polvo y si varían las cantidades de reactivos.
      Yo utilizo 20 ml de ácido sulfúrico, 12 gr de sulfato de potasio 1 ml de slcion de sulfato de cobre, destilo con 10 ml de NaOH 30% y 200 ml de agua, recojo en ácido bórico 40% y titulo con H2SO4 0.1N. Desde ya, les agradeceré una respuesta

      • “Hola buenos días. No sabemos exactamente las cantidades ideales para cada tipo de muestra. Como norma general aconsejamos 1 gramo pero siempre se puede optimizar en función de cada tipo de muestra.
        Un buen procedimiento a seguir para definir qué cantidades de muestra nos pueden “ir bien” es partir de la normalidad del ácido que vamos a utilizar para la valoración.

        Por ejemplo, en su caso nos comenta que utiliza ácido sulfúrico 0.1 N.
        En nuestro equipo automático (PN-A) aconsejamos un consumo de ácido para la valoración entre 6 y 12 ml para obtener una resolución suficiente que minimice la influencia de los errores absolutos y un consumo de ácido no muy elevado para optimizar el tiempo de destilación.
        En este caso sería ideal muestras que contuvieran entre 8 y 17 mg de Nitrógeno. Así se podría adaptar el peso de la muestra a esos contenidos de Nitrógeno. En el caso de un patrón de amonio sulfato pesaríamos entre 38 y 80 mg .
        Si usted decide que el consumo de ácido ideal para su manera de trabajar debería ser otro, por ejemplo entre 10 y 20 ml podría realizar el mismo cálculo. Sus muestras deberían tener entre 15 y 29 mg de Nitrógeno.

        Con respecto a los reactivos utilizados tampoco hay un criterio absoluto. Sencillamente en algunos reactivos como el ácido sulfúrico de la digestión nuestra propuesta es comenzar con una cantidad suficiente y una vez obtenidos buenos resultados ir reduciendo esta cantidad de manera progresiva para optimizar el coste del proceso.
        En su caso utiliza 20 ml, nosotros aconsejamos entre 15 y 20 ml pero nos costa que se realizan ensayos con cantidades inferiores, del orden de 5 ml obteniendo buenos resultados. Tenga en cuenta que el ácido sulfúrico debe ser suficiente para realizar la digestión completa de la muestra (por lo tanto en exceso) pero que el resto de ácido de la digestión se tiene que neutralizar con hidróxido de sodio para la destilación y por lo tanto a más ácido sobrante más consumo de hidróxido.

        A parte de todo esto, si usted ya realiza el ensayo con buenos resultados, nuestro consejo es modificar lo mínimo posible. En todo caso puede probar a reducir la cantidad de muestra, o de alguno de los reactivos para intentar optimizarlo si es posible.

        Saludos.

  64. Otra consulta es si tengo muestras que poseen gran cantidad de grasa, debe tener algún tratamiento especial con la muestra?

  65. Buenas tardes … mi pregunta es la siguiente . Si usamos en la digestión ácido sulfúrico que aparentemente esta contaminado X que presenta una coloración café claro no se cual es el factor X que se compro una que estaba de color transparente y al almacenarlo encontramos de ese color. . Será que ese ácido aún sea usable para la digestión?

    • ” Hola buenos días.
      No lo sabemos.
      Puede probar y realizar una prueba con patrones de acetanilida y decidir en función de si el resultado es correcto o no.
      Saludos”

  66. Buenas tardes,
    Tengo que realizar unas pruebas con un destilador Pronitro I algo antiguo, pero que parece que funciona perfectamente.
    ¿Puedo utilizar Sulfato férrico amónico dodecahidrato ( NH4Fe(SO4)2·12H2O ) como patrón para verificar la destilación?, si es así, ¿cuáles serían los cálculos?
    Es por saber si puedo adelantar en vez de pedir el Sulfato de amonio.
    Muchas gracias

    • “Hola buenas tardes.
      Nosotros no hemos hecho nuca esta comprobación sin embargo he consultado con algún laboratorio colaborador nuestro y nos han asegurado que es posible.
      Lo único que debe tener en cuenta es que para calcular el Nitrógeno teórico, es decir la cantidad de Nitrógeno que tiene su patrón no puede utilizar las formulas que tenemos en la web. Debe utilizar el peso molecular del NH4Fe(SO4)2·12H2O .
      Saludos”

      • Buenas tardes de nuevo,
        Muchas gracias por la respuesta, finalmente hice las pruebas y todo parece correcto, con unos porcentajes de recuperación buenos.
        Por otro lado, a la hora de utilizar muestras “reales” se gelatiniza el resultado de la digestión. Tras diluir con agua (25 ml) y debido al calentamiento, vuelve al estado líquido, pero con algún tipo de residuo blanquecino. Al realizar la adición de NaOH el color no es azul sino marrón oscuro, aunque parece que los datos obtenidos no son extraños. Las cantidades son 1 g de muestra, 10 ml de H2SO4 y 8 g de catalizador.
        Muchas gracias por adelantado a cualquier aclaración.

        • “Buenos días.
          En principio todo lo que nos explica sobre la gelatinización de las muestras reales , el color, etc. es normal.
          Y según nos dice los resultados son los esperados, así que no tenemos que hacer ningún comentario más.
          Muchas gracias a usted.
          Saludos”

  67. buena tarde estimados,
    tengo una consulta con respecto a la digestión, el producto final de este proceso debe ser un liquido totalmente transparente, sin residuos.
    porque en este proceso tengo el problema que me queda residuo en los tubos de ensayo. los tiempos que estoy dando son los siguientes: 150 °C (15 minutos), 300 °C (15 minutos) y por ultimo 400°C (60 minutos).

    • “Hola. Además del tiempo de digestión que parece correcto debería revisar la cantidad de catalizador y la cantidad de ácido sulfúrico. Exceso de catalizador o defecto de sulfúrico pueden producir esta digestión incompleta.
      De cualquier manera, el resultado de la digestión debe ser un liquido transparente pero en ocasiones aparecen una mínima cantidad de residuos y sin embargo la digestión ha sido completa. Para explicarlo de alguna manera podríamos decir que si el residuo observado es inferior al 1% probablemente la digestión sea completa.
      Espero que esa le sirva de ayuda.
      Saludos”

      • buen día, estoy agregando 20 ml de ácido sulfurico y una pastilla de catalizador, estoy tomando 1 gramo de muestra.

        tienen algunos parametros del proceso de digestion para Harina de trigo

        • “Hola.
          En principio tanto la cantidad de muestra como de ácido sulfúrico parecen correctas.

          Si está utilizando el catalizador al que hacemos referencia, (Catalizador Kjeldahl 6.25% Cu tabl. 8g PANREAC 174428)
          Una tableta será suficiente, sin embargo nos consta que se comercializa este catalizador en otros formatos. Asegúrese de que el peso es de aproximadamente 8 gramos.

          Si utiliza otro catalizador debería consultar biografía para conocer la cantidad necesaria.
          También podría probar a reducir la muestra a la mitad 500 mg. Un exceso de muestra podría provocar también una digestión incompleta.

          Saludos

          • buena tarde estimad@s,

            cuando realizo el proceso de destilación el producto final se tiñe color rosa, con este color obtenido no puedo realizar la titulación con ácido.

            sera problema de la digestión.

          • “Buenos días.
            Tendría que darnos más datos.
            ¿Podría decirnos de manera resumida el proceso que sigue?
            Cantidades de muestra y de reactivos , tiempos y reactivos utilizados.
            ¿Qué indicador está utilizado?
            Saludos”

          • buen día estoy utilizando un catalizador Kjeltec,

            3.5 g K2SO4
            0.4 g CuSO4 X 5H2O

            cuanto necesitaría para poder realizar la digestión.

          • “Buenos días.
            Nosotros utilizamos normalmente 8 gramos catalizador distribuido por PANREAC que contiene un 6.25% de CuSO4 X 5H2O.
            En su caso parece que el contenido es aproximadamente 10.25% de CuSO4 X 5H2O.
            Puede hacer el cálculo de lo que necesita para obtener una cantidad equivalente, aunque no tenemos la certeza de que el comportamiento de la reacción sea lineal ya que añadiría menos cantidad de K2SO4.
            Saludos”

  68. Hola que tal, realizo una investigacion con residuos alimenticios, realizare determinacion de proteina, la muestra colectada esta muy liquida, es conveniene realizarse asi o es importane secar. gracias

    • “Hola buenos días.
      Para muestras líquidas o con un gran contenido de agua se aconseja realizar un primer paso de la digestión más largo para poder evaporar todo el agua antes de empezar el proceso de digestión propiamente dicho.
      Trate su muestra como si se tratara de agua. Podría programar un primer paso de digestión de 90 minutos para asegurarse de que el agua se ha evaporado completamente y a partir de aquí seguir el proceso normal.
      Saludos”

  69. Hola me puedes ayudar por favor ultimamente no me esta saliendo el valor de la acetanilida que uso como patron en mis analisis de nitrogeno total doble digestion.
    el peso es de 0.3 y 40 ml de acido sulfurico puro,acido salicilico y tio sulfato de sodio catalizador 7.5 d sulfato de potasio y 0.4 gr oxido de mercurio el tiempo de digestion es una hora 45 min, luego se agrega 50 ml de agua y se destila con soda al 50% mas tiosulfato.. a veces al pasar la soda y se mezcla con la muestra lo q obtengo es una muestra blanquinosa no transparente.. mi recolector es acido sulfurico al 0.25N Y mi titulante es NaOH AL 0.25N

    • “Buenos días.
      Cuando dice que últimamente no le sale el valor de acetanilida ¿qué quiere decir?
      ¿Le salen valores inferiores a lo esperado o superiores?
      ¿Hasta ahora le salían valores correctos y de repente no?
      ¿Ha cambiado algún reactivo, algún parámetro del proceso o algún equipo?
      Sin esta información no sabríamos que decirle.
      Saludos”

  70. hola
    disculpa cual es el origen del factor de conversión?

    • ” Hola buenas tardes.
      Supongo que se refiere al factor de conversión de nitrógeno a proteína.
      Se utiliza un factor porque con el método Kjeldahl determinamos la masa de nitrógeno pero las proteínas están formadas por más componentes.
      Multiplicar la masa de nitrógeno por el factor nos proporciona una aproximación de la masa de las proteínas.
      Saludos.”

  71. Hola ! Quisiera consultar que pasa si destilo mas volumen del que agregue de agua destilada , existe algun riego de error ?

    Muchas Gracias


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