Notas de Aplicaciones


Francisco Santiago. Engineering Department.


The total protein content in food is made up of a complex mixture of proteins. These exist in a combination with carbohydrates or lipids, which may be physical or chemical. Currently, all methods for determining the total protein content of foods are of empirical nature. An absolute method is isolation and direct weighing of the protein but this method is only used occasionally in biochemical research, as it is difficult and not very practical.

In 1883, the Danish researcher Johann Kjeldahl developed the method currently most used for protein analysis (Kjeldahl method) by organic nitrogen determination. In this technique, proteins and other organic components of food are digested in a mixture with sulfuric acid in the presence of catalysts. The total organic nitrogen is converted by the digestion in ammonium sulfate. The digested mixture is neutralized with a base and distilled later. The distillate is collected in a boric acid solution. Borate anions thus formed are titrated with standarized HCl (or H2SO4) to determine the nitrogen content in the sample.

The analysis result is a good approximation of crude protein content of the food as nitrogen also comes from non-protein components.

Kjeldahl method has undergone several modifications. Originally, potassium permanganate was used to carry out the oxidation process (digestion); however, the results were not satisfactory, so that reagent was discarded. In 1885, Wilforth found that digestion could be speed up by using sulfuric acid and adding a catalyst.  Gunning in 1889 proposed the addition of potassium sulfate, which raises the boiling point of sulfuric acid used in the digestion, in order to reduce the reaction time.

Nowadays, copper sulfate pent hydrated CuSO4.5H2O is mainly used as a catalyst.



(1) n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
Protein                                  heat→


(2)  (NH2)SO4 + 2 NaOH                        →                     2NH3 + Na2SO4+ 2H2O
(3)  NH3 + H3BO3 (boric acid)                  →                 NH4 + H2BO3- (borate ion)


Borate anion (proportional to the amount of nitrogen) is titrated with standarized HCl (or H2SO4):

(4)    H2BO3- + H+               → H3BO3

J.P. SELECTA provides the necessary equipment for carrying out the process by the Kjeldahl method.

- 1 electronic burette “Digitrate-Pro 50” of resolution 0.01ml.
Part No 0182026.

-1 precision analytical balance “FA-2204B” of resolution 0,1mg. 
Part No.

- 1 Digestion unit (Bloc Digest) for 6, 12 and 20 positions. 
Part No.
4000629, 4000630 and 4000631.

- 1 Scrubber unit. 
Part No. 4001611

 - 1 Water circulation pump.
Part No.

- 1 Kjeldahl distiller (Pro Nitro M, S or A). 
Part No.
4002627, 4002851 and 4002430.

- Laboratory miscellaneous material.


Reagents prepared:

It is recommended to use reagents already prepared, specially the titration HCl (or H2SO4). Any error in its preparation may directly affect the determination result.

Use the following reagents, or other equivalent trademarks:

•      Boric acid (powder) 99.5%   PANREAC 141015
•      Mixed indicator 4.8 (or 5) RV   PANREAC 283303

(Methyl Red + Bromocresol Green)

•      Mixed indicator 4.4 RV   PANREAC 282430

(Methyl Red + Methylene Blue)

•      HCl 0.1N SV   PANREAC 171023
•      HCl 0.25N SV   PANREAC 182318
•      H2SO4 0.1N SV    PANREAC 181061
•      H2SO4 0.2N SV    PANREAC 182011
•      Sodium hydroxide 40% RE   PANREAC 171220

(For N determination)

•      Acetanilide 99% (Standard for validation)   PANREAC 151005
•      Ammonium sulfate (Standard for validation)   PANREAC 131140
•      Kjeldahl catalyst 6.25% Cu tabl. 8g   PANREAC 174428

Preparation of ammonia fixative solution.

1.- With mixed indicator 4.8 (or 5):

Prepare the solution of the following formula for 1 litre of fixative solution:

•      Weight 10g of boric acid (powder).   PANREAC 141015
•      Dissolve in 1 litre of distilled water.
•      Add 15ml of mixed indicator 5.    PANREAC 283303

2.- With mixed indicator 4.4:

Prepare the solution of the following formula for 1 litre of fixative solution:

•      Weight 10g of boric acid (powder).   PANREAC 141015
•      Dissolve in 1 litre of distilled water.
•      Add 10ml of mixed indicator 4.4.   PANREAC 282430



•   Triturate, homogenize and mix the sample.
•   Weight between 1 and 2g of sample.
•   In samples with very small nitrogen content, take sample enough to contain at least 5mg of     nitrogen.


•   Add between 10 and 15ml (macro tube) of H2SO4 96-98% and 1 tablet (8 gm) of catalyst
(For micro tube, the H2SO4 maximum is 5ml).
•   Build a system for fumes extraction or a scrubber with Na2CO3.
•   Perform the digestion in three steps:

1. Depending on the sample water content, begin digestion by evaporating water at 150ºC     during 15-30 minutes.
2. Make a second step between 270 and 300ºC during 15 or 30 minutes to reduce production     of white fumes.
3. Continue the digestion at 400ºC between 60 and 90 minutes.

Some examples:

Cheese or meat:
Step 1: 150ºC / 30’              Step 2: 270ºC / 30’              Step 3: 400ºC / 90’

Step 1: 150ºC / 15’              Step 2: 300ºC / 15’              Step 3: 400ºC / 60’

Visual control: The result is a clear transparent liquid with light blue, green or yellow colour, depending on the catalyst used. There should be no black residues attached to the tube wall.

Note: During digestion, the samples foam production must be controlled. If this is excessive, step 1 should be extended.


•   Take the sample tubes out of the digestor block and let them cool at ambient temperature     (this could be forced by carefully immersing the tubes in a little water).
•   Add about 25ml of distilled water on each tube.
•   Add the water slowly and shaking the tube in order not to solidify the sample. If necessary,     heat slightly the tube (for example, by inserting it in the digestor block still hot).
•   Cool again until it arrives at ambient temperature.
•   To prevent nitrogen losses and violent reactions, do not insert the tube still hot in the distiller.


•   Place a 250ml Erlenmeyer flask at the coolant outlet with 50ml of boric acid and some drops     of indicator.
•   Program a dosage of NaOH from 50 to 75ml.
•   Insert the sample tube in the distiller.
•   Distillate it to collect 250ml in the Erlenmeyer flask (50ml boric + 200ml distilled).

Visual control: Once added the NaOH, the sample must have a bluish colour. If not, please add more NaOH.


•   Titrate the distillate with HCl or H2SO4, until the colour changes (endpoint: pH 4.65)
HCl moles = NH3 moles = N moles in the sample
H2SO4 moles = 2 NH3 moles = 2 N moles in the sample
•   Do the calculation:

mg N = N x  V   x  14


N = Titration acid normality.
V = Consumed acid volume.
14 = Nitrogen atomic weight.

•   To change to protein content, correct it by the appropriate factor according to the sample     nature (6.25 by default).
•   Periodically perform a blank test and subtract it from the result.

% proteins =  P2/P0 x 100 x F


P2: Nitrogen (mg).
P0: Sample weight (mg).
F: Protein factor.
(6.25 by default)

Protein factor in some foods:

Almonds 5,18
Nuts 5,30
Nuts - peanuts 5,41
Jelly 5,55
Soya 5,71
Barley, trenches, rye 5.83
Wheat, whole flour 5,83
Flours (not whole ones) 5,70
Rice 5,95
Corn 6,25
The rest of foods 6,25
Saved 6,31
Milk and milky products 6,38


This verification is widely used to certify the distiller operation.

You have to prepare a sample whose nitrogen content is known. Then distil, titrate with HCl 0.25N and calculate the detected nitrogen.

The nitrogen percentage detected on the sample is called nitrogen recovery.

Prepare the sample:

Nitrogen content of an ammonium sulfate sample:

Formula: (NH4)2 SO4
Molecular weight: 132.14
Factor: 14 * 2 / 132.14 = 0.212
mg of nitrogen = 0.212 * mg of ammonium sulfate.

•   Weight about 100mg of ammonium sulfate. The exact weight will be P0.
•   Nitrogen exact weight is:

P1 (mg) = P0 x 0,212

•   Distil by adding 25ml of NaOH.
•   Once distilled and titrated, we get the detected nitrogen (mg): P2

P2 = N x V x 14


N = Titration acid normality (HCl 0.25).
V = Consumed acid volume.
14 = Nitrogen atomic weight.

•   Calculate the recovery:

R (%) = P2 / P1 *100

•   An acceptable recovery is between 99.5 and 100.5 %.

If we use HCl of different normality, prepare samples:

Normality Ammonium sulfate samples

0,05                               20... 40mg

0,1                                  40... 90mg

0,25                               100… 200mg

0,5                                 200… 400mg


This verification is widely used to certify the complete process operation of the Kjeldahl nitrogen analysis, which includes digestion, distillation and titration stages.

You have to prepare a sample whose nitrogen content is known. Then digest, distil, titrate and calculate the detected nitrogen.
The nitrogen percentage detected on the sample is called nitrogen recovery.
Acetanilide is used to do this verification.

Prepare the sample:

Nitrogen content of an acetanilide sample:

Formula: C8H9NO
Molecular weight: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg of nitrogen = 0.1035 * mg of acetanilide.

•   Weight about 250mg of acetanilide. The exact weight will be P0.
•   Nitrogen exact weight is:

P1 (mg) = P0 x 0,1035

Sample digestion:

•   Place the acetanilide in the tube, add 10ml of 98% sulfuric acid and a Kjeldahl catalyst tablet.
•   Digest at 400ºC for 1h (The result must be a transparent liquid with blue colour).
•   Cool and add 25ml of distilled water on each tube. Take care to avoid spillage. Water reaction     over sulfuric acid is violent.


•   Distil by adding 75ml of NaOH. Use HCI 0.25N for titration.
•   Once distilled and titrated, we get the detected nitrogen (mg): P2


N = Titration acid normality (HCl 0.25).
V = Consumed acid volume.
14 = Nitrogen atomic weight.
P2 = N x V x 14

•   Calculate the recovery:

R (%) = P2 / P1 *100

•   An acceptable recovery is between 99.5 and 100.5 %.


The main error fonts are:

During the digestion process:

1.- The inclusion of non-protein nitrogen (although the amount of this nitrogen is usually negligible compared with the protein nitrogen one).
2.- Nitrogen loss during digestion:
An excess of sodium or potassium sulfate added to the acid to raise the boiling point may produce decomposition by the heat and therefore a loss of nitrogen.
On the other hand, the catalyst excess (generally copper) may also produce nitrogen loss.
3.- Sample incomplete digestion:
It is usually due to a lack of reaction time or sulfuric acid.

During distillation:

1.- Incomplete neutralization of digested mixture. It is necessary to add enough NaOH to neutralize the sulfuric acid excess resulting from the digestion as well as to transform the entire ammonium formed in the ammonia digestion.
2.- Ammonia loss due to leaks in the distillation circuit.
3.- Ammonia loss due to insufficient cooling in the condenser.


A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists.  Official Methods of Analysis. Washington, D.C.
Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212.
Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products.  Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi.
Yeshajahu P. & Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2on Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.

Comentarios (224) Trackbacks (0)
  1. excelente información me fue de mucha ayuda…. se les agradece

  2. excelente información muy clara, me ayudo mucho


  4. es una informacion muy completa espero y mucha gente mas hiciera este tipo de trabajos que ayuda mucho a personas como yo que aveces no nos acordamos bien de la tecnica

  5. muchas gracias por la informacion, esta bien detallada lo cual me ayuda para mi proyecto de analisis organico…gracias

  6. Perdon pero como logras hacer que el % de recuporación cumpla el criterio,

    Por ejemplo peso 3.3 g de SUlfato de amonio y los disuelvo e 250 mL de agua , los mg de N serian (3.3*.212) de 0.6996……p1
    Ok analizo 5 mL y gasto de HCl 0.1 N 9.5 mL
    P2= 9.5*0.1*14=13.3

    %R = (13.3/0.6996)*100 = 1901.08

    QUE ME FALTA????

    • Buenas tardes Araceli,

      El primer cálculo no es correcto porque la masa del sulfato de amonio debe estar en mg
      3.3 g (3300mg ) de sulfato de amonio contiene (3300*.212)= 699.3 mg de Nitrógeno.
      Si los disuelve en 250 ml de agua destilada la disolución tendrá 2.7984 mg de N / ml
      Si prepara como muestra 5 ml de esta 2.7984 mg de N. Es decir su muestra contiene 13.992 mg de N
      El consumo teórico de HCl 0.1 N es:

      HCl ml teórico ml = N( muestra) mg / (masa molecular de Nitrógeno x Normalidad HCl)

      HCl = 0.014 / ( 14.0067 x 0.1) ml HCl
      HCl = 9.99 ml HCl

      Es decir el consumo teórico de HCl 0.1 N para esa muestra es de 9.99 ml.

      1.- El peso de la muestra de sulfato de amonio tiene que pasarse primero a mg para hacer el calculo. (3300*.212)= 699.3 mg N (P1).
      Si realizamos es calculo con el peso en mg el resultado de la recuperación es del 95.10 %

      2.- Para conseguir una recuperación más próxima al 100% tiene que tener en cuenta al hacer los cálculos que la normalidad de HCl sea muy precisa.
      Con N = 0.09 la recuperación es 85.59 %
      Con N = 0.10 la recuperación es 95.10 %
      Con N = 0.11 la recuperación es 104.61 %
      Es decir hay que tener en cuenta al hacer los cálculos que un error de una centésima en la normalidad del HCl provoca errores de orden del 5 % en la recuperación.
      Una botella de HCL 0.1 N abierta una semana antes aumenta su concentración dependiendo de las condiciones de almacenamiento (influye el calor, la humedad,…)

      Aconsejamos para hacer la verificación utilizar una botella de HCl abierta en el momento de realizar la prueba y una vez abierta guardarla en un refrigerador para que la normalidad varíe lo mínimo posible.

      Saludos y esperamos que la información le sea útil.

      Grupo Selecta

  7. En el proceso de titulacion o valoracion que es mejor? una bureta electronica o un valorador o titulador automatico? nosotros contamos con un destilador pro nitro M y hacemos una titulacion manual y queremos mejorar nuestros resultados, que valorador o titulador nos recomiendan?

    • En principio siempre es más preciso un titulador automático, sobre todo porque es más repetitivo pero se pueden obtener excelentes resultados (comparables a los del titulador) con una bureta electrónica (con resolución 0.01 ml) si el operario que la utiliza es metódico en su forma de trabajar.

      Para mejorar resultados lo más importante es la normalidad del reactivo utilizado en la valoración.

      1.- Que sea muy precisa. Por ejemplo si utilizamos HCl 0.100 N y por un error en la preparación las normalidad es 0.105 N la recuperación obtenida será del orden del 95%
      2.- El reactivo utilizado para valorar aumenta su concentración con el paso del tiempo debido a la evaporación.

      Con respecto a tituladores no podemos hacer ninguna recomendación, hay muchos en el mercado y trabajan con mucha fiabilidad.


      Grupo Selecta

  8. Estoy muy interesado en conocer mas sobre estos analisis de obtencion del porcentaje de proteina en soya, maiz y piensos para animales.

  9. Hola,
    Estoy interesada en la determinación de N total en muestras de musgos, es necesario realizar un pre-tratamiento (¿meter musgo en la estufa para perder humedad?) antes de la digestión o se puede digerir directamente.

    • Apreciada Angeles
      Se hace la digestión directamente.
      Si el contenido de humedad es muy elevado, se puede programar un tiempo de digestión algo mayor para el primer paso (aprox 150ºC entre 20 y 60 minutos en función de la humedad de la muestra).

  10. Ante todo muchas gracias por la publicación de esta página y facilitar el trabajo diario de laboratorio.
    Mi pregunta es la siguiente:
    Como puedo controlar la temperatura que se alcanza en la digestión?
    Puede ser que por un exceso de temperatura o tiempo las proteínas se “quemen”.

    • Apreciado Fernando
      La temperatura alcanzada por la digestión está controlada por el regulador del bloque digestor.
      Si lo que desea es medir qué temperatura alcanza una muestra cuando se realiza la digestión, es muy difícil ya que significaría introducir una sonda en ácido sulfúrico 98% a una temperatura aproximada de 400 ºC. No conocemos ningún tipo de sonda que resista estas condiciones.
      Por otro lado, se podría intentar mediante un termómetro de infrarrojos pero también resultaría poco fiable y peligroso.
      Si lo que desea es validar el proceso, es mejor validarlo con un patrón de acetanilida. De esta manera tenemos la seguridad de que en todo momento se cumplen las condiciones necesarias para una digestión completa.
      Por otro lado, el exceso de tiempo o de temperatura no destruye las proteínas.
      Si lo que encuentra es una falta de recuperación de proteína después del proceso completo puede ser por una digestión incompleta (falta tiempo o temperatura en la digestión) o por una insuficiente adicción de NaOH en la destilación.

  11. Ante todo gracias por la respuesta. Mi problema es en la harina de pescado, a veces al momento de la destilación, al verter el NaOH al 40%, toma una coloracion azulada y otras marrón casi color carbonizado, oscuro… a qué se debe que en algunas ocaciones toma diferentes coloraciones?… Muchas gracias por su invalorable ayuda. Atte L. Rios

    • Apreciado Luis
      El color azul o marrón oscuro depende de la cantidad de NaOH que añadimos a las muestra para iniciar la destilación.
      El color azul nos garantiza que hemos puesto exceso de NaOH en la muestra para neutralizar todo el ácido sulfúrico que ha quedado después de la digestión y para que reaccione con el amonio sulfato que se ha formado en ésta.
      Cuando no se alcanza este color azul y la muestra queda de color marrón, no tenemos esta garantía aunque es posible que sí haya exceso de NaOH y el resultado del análisis sea correcto.

      ¿A qué se debe que en unas muestras si se alcance el color azul y en otras no?
      Fundamentalmente a que:
      1.- No todas las muestras tienen la misma cantidad de proteínas. Muestras con diferente cantidad de proteínas “consumen” un volumen diferente de ácido sulfúrico durante la digestión.
      2.- Normalmente el ácido sulfúrico que ponemos en un tubo de muestra para la digestión se añade con poca precisión ( y no es necesaria). Puede haber diferencias de 1 o 2 ml entre muestra y muestra y esta diferencia puede provocar la diferencia de color en el momento de la destilación.

      Si desea tener la seguridad de que añade exceso de NaOH, una vez iniciada la destilación si la muestra en concreto no alcanza el color azul, puede añadir más cantidad de NaOH. En el Pronitro M, por ejemplo pulsando la tecla de flecha abajo para añadir 20 ml más.
      Otra opción es programar un volumen inicial mayor.

      De todas formas, como le decía anteriormente, no es imprescindible alcanzar este color azul. Con un cálculo estequiométrico puede determinar la cantidad de NaOH que necesita y programarla en el equipo. De esta manera sabrá que la cantidad añadida es suficiente independientemente del color final de la muestra.


  12. Buenos días.
    Este método de análisis es selectivo para todo tipo de alimentos? He obtenido resultados muy elevados de proteína en edulcorantes de mesa, estos contienen nitrógeno pero no son de origen proteico, tipo sacarina ácida, existe algún método de análisis para cuantificar proteínas en este tipo de alimentos?
    Un saludo y gracias

    • Buenos días, Alfonso.
      En primer lugar, disculpa el retraso en responderte.
      No tenemos experiencia en análisis de edulcorantes y aunque hemos consultado con laboratorios que colaboran con nosotros, ninguno nos han sabido dar una respuesta definitiva sobre la cuestión que nos planteas, ya que tampoco analizan este tipo de muestras.
      Lamentamos mucho no poder ayudarte.
      Recibe un cordial saludo

  13. lo maximo esta informacion me sirvio muchisimo en la elavoracion de mi informe de practica,muchas gracias…..

  14. Buenas tardes:
    Tengo una inquietud,en la determinación de proteíonas cambie las pastillas catalizadoras antes usaba sulfatos con selenio y ahora las uso sin selenio, sin embargo todo me modifico, la digestión no queda traslucida sino como pastosa y al titular me dan valores mayores a lo normal, que puede estar afectando el proceso, los demás reactivos son los mismos.

    • Buenos días, Rocio
      Si cambia de catalizador, tiene que reajustar el proceso.
      El catalizador modifica propiedades de los reactivos y cada catalizador lo hace de manera diferente.
      Por los datos que nos envía parece que la digestión no es completa.
      Debería probar a aumentar la cantidad de sulfúrico que utiliza en cada muestra o a aumentar el tiempo de digestión.
      Una de estás dos propuestas tendría que solucionar el problema.
      Por ejemplo: si utiliza catalizador de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) debe poner para 15 ml de ácido sulfúrico 98%, 8 gramos de catalizador y el último paso de la digestión debería durar al menos 1h.
      Recibe un cordial saludo

  15. Si utilizo sulfato de potasio y sulfato de cobre pentahidratado, en que cantidades deberia anadir cada uno de estos reactivos para0.5 g de muestra y 15 mL de acido sulfuric? Como puedo asegurar que la cantidad de los mismos es la correcta/

  16. muy bueno artículo, me gustaria que me enviaran el metodo para determinacion de amonio por arrastre de vapor, muchas gracias

  17. estoy trabajando con una muestra de maiz pero he tenido problemas en alcancar la coloracion verdosca tranparente en la etapa de degistion a que se debe esto ,

    • Buenos días, Francisco
      El problema puede ser debido a:
      1.- Insuficiente ácido sulfúrico 98% para realizar la digestión completa (o exceso de muestra).
      2.- Tiempo de digestión insuficiente.
      3.- Temperatura insuficiente en el último paso de la digestión.

      Otra causa no tan probable:
      4.- Exceso de catalizador

      Un saludo

  18. hola excelente trabajo .. ..bueno he utilizado este método , pero la verdad nuestro profesor nos ha dado un cuestionario en donde nos habla de sustancias a utilizar en un ensayo en blanco y no se que hacer estuve investigando y no doy con la respuesta y necesito ayuda por que estoy en cero …:(

    • Buenos días,
      Normalmente, para un ensayo en blanco se utiliza agua destilada.
      El resultado debe ser muy próximo a cero y nos da una idea del grado de contaminación que tenemos en nuestros reactivos.
      Un saludo

  19. que diferencia tengo entre una muestra liquida y otra seca?????? un concentrado por ejemplo.

  20. Buenas, primero felicitar por el muy buen material que subieron a esta pagina, es de mucha ayuda.
    Lo segundo es una consulta que tengo para hacerles. Estoy utilizando uno de sus equipos, un bloc digest para 6 tubos, para la determinación de proteínas de harina de carne y hueso. En general no llegamos a completar 6 muestras por día para tirar (lo usual es que tiremos 4), por lo que nos quedan casi siempre 2 o más tubos sin contenido. Mi pregunta es si el dejar los tubos vacíos durante la digestión me puede generar algún problema tanto para el equipo como para el resultado final de proteína.
    Muchas gracias.

    • Buenas tardes
      No hay ningún inconveniente. Pero los tubos deben estar vacíos o con ácido. Nunca con agua u otro líquido cuyo punto de ebullición sea inferior al del ácido sulfúrico.

  21. Muy buena informacion y muy bien explicado, me ayuda bastante porque tengo que poner a punto un semiautomatico, me saco varias dudas. gracias

  22. Buena informaciòn . pero ahora quiero saber cuales otros factores puedo usar para estimación de proteinas : y para muestras especificas como :frijol, trigo, maiz, leche, carne de ave y huevo??? les agradeceria que me informaran… gracias

    • Hola, para ello es importante acudir a las normas oficiales, en ellas puede encontrar los distintos factores que existen para varias muestras.

  23. Hola,

    como hago para verificar y eliminar:
    - Perdida de amoníaco por fugas en el circuito de destilación.
    - Perdida de amoniaco por refrigeración insuficiente en el condensador.
    Muchas gracias, saludos

    • Buenos días,

      Para comprobar fugas en el circuito de destilación debería retirar las tapas laterales del equipo y simplemente observar si hay salida de vapor en algún punto del circuito.
      Respecto a la refrigeración insuficiente debería comprobar que el destilado tiene una temperatura inferior a 20 ºC en otro caso es probable que se produzcan pérdidas.
      Si con estas dos comprobaciones no consigue detectar la causa de las pérdidas debería ponerse en contacto con un servicio técnico de Selecta.



  24. Quiero saber cual es el valorde la avena de la tabla de kjendalh

  25. Disculpa, como se obtiene el factor de convercion de 6.25

  26. que diferencia hay entre la proteína en base seca y en base humeda??, como corrigo mi resultado de una harina de humedad 13.5 a estándar 14, o un trigo de humedad 9.95 a la estándar 12

    • Buenos días

      No sé si he entendido muy bien la pregunta que plantea. Si se refiere a la diferencia entre una misma muestra con diferente tipo de humedad, debe tener en cuenta que en el momento de pesar la muestra está pesando el extracto seco y la humedad.
      Si trabaja siempre con extracto seco podrá compararlas.
      Si no le es posible trabajar con extracto seco puede calcular el % de proteína sobre el extracto seco a partir del % obtenido con la muestra húmeda ( ya que como me parece observar en su pregunta conoce la humedad de cada muestra) Y compararlo una vez haya calculado el % sobre extracto seco.
      Yo le haría una pregunta, ¿Necesita conocer el % de proteína de una muestra que tenga siempre el mismo grado humedad?



  27. Gracias por la ayuda, quiero que sepan que me ha ayudado a entender los cálculos y que nadie ha sabido explicarme.

  28. hola mi nombre es ferney
    por favor podrian ayudarme con el peso de las diferentes muestras a analizar
    por ejemplo para frutas, cereales, granos, hortalisas, alimento animal entre otros.
    muchas gracias
    espero su colaboracion.

    • Buenos días Ferney. Aconsejamos utilizar alrededor de 1 g (1000 mg) de muestra. Solamente deberías reducirla en caso de que el contenido en nitrógeno sea muy elevado para evitar un consumo excesivo de ácido de valoración. Si trabajas con un Pronitro A lo ideal es que el consumo de ácido esté entre 6 y 15 ml así que las muestras deben tener una cantidad de nitrógeno que puedan ser valoradas con estos volúmenes.
      Te pongo algún ejemplo con patrón de sulfato de amonio:

      Normalidad del ácido de valoración Muestra de sulfato de amonio.
      0,05 20 … 40 mg sulfato de amonio (4.24 – 8.48 mg Nitrógeno)
      0,1 40 … 90 mg sulfato de amonio (8.48 – 19.08 mg Nitrógeno)
      0,25 100… 200mg sulfato de amonio (21.20 – 42.40 mg Nitrógeno)
      0,5 200… 400mg sulfato de amonio (42.40 – 84.80 mg Nitrógeno)

      Deberías aplicar el mismo criterio a tus muestras.



  29. buen dia
    gracias por la respuesta, pero esto que me dices no importa si es para cualquier otra matriz, supongamos que voy a realizar el montaje para 5 muestras y una es de una leche, otra de un yogurt, una fruta, carnicos y un concentrado para ganado.

    segun lo que me dices es que en las 5 muestras debo pesar el mismo gramo para todas??

    • Buenos días.

      No, creo que no me he explicado bien, lo que quiero decir es que para cada tipo de muestra es mejor pesar la cantidad adecuada para esa muestra.
      Imagina que tuvieras una muestra, A con un 50% de nitrógeno y otra, B con un 5% Si pesas 500 mg de cada muestra en el caso de la A obtendrás 250 mg de nitrógeno y en el de la B 25 mg. Puedes trabajar perfectamente con estas cantidades pero en el momento de la valoración y con un reactivo de valoración 0.25 N gastarás del orden de 70 ml en el caso de la A y 7 ml en el de la B . Por eso conviene adecuar el peso al tipo de muestra.

      Por ejemplo de la A 100 mg (obtendrás unos 50 mg de nitrógeno) de la B 1000 mg (obtendrás unos 50 mg de nitrógeno) el consumo en la valoración sería similar , del orden de unos 14 ml.



  30. cordial saludo
    necesito validar este metodo y no se como hacerlo me podrias ayudar con esto??

  31. buen dia
    el patron que se usa es sulfato de amonio
    de este necesito preparar una solucion de que concentracion me recomienda?
    o se puede agregar en polvo directamente el reactivo.

  32. Hola

    Estoy usando un sistema micro. En la etapa de digestión, 10 ml de ácido sulfúrico concentrado , 1.5 g del catalizador y 0.50 g de muestra. Apago el digestor cuando observo un color verde oscuro en los tubos. A continuación, al destilador, le añado 10 ml de agua destilada e NaOH pero no se observa el color marrón. Se añade más NaOH?

    • Buenos días Andrea.

      Si, efectivamente, parece que debes añadir más NaOH. Para que aparezca el color marro al que haces referencia la HaOH debe estar en exceso con respecto al sulfúrico que ha sobrado de la digestión. Probablemente también observarás que no recuperas nada de nitrógeno.



  33. Estimados, en nuestro laboratorio usamos como catalizador 7g de sulfato de potasio con 0.8g de sulfato de cobre. Es bueno este tipo de catalizador o nos recomiendan otra combinación de reactivos?

    • Buenos días.
      No tenemos experiencia sobre la combinación que están utilizando pero podría ser perfectamente válida.
      Nosotros recomendamos en nuestro manual Catalizador Kjeldahl (Cu) (6.25% en CuSO4.5H2O) Que tiene una combinación muy similar a la que utilizan.
      De cualquier manera si obtienen buenos resultados en sus análisis no deberían cambiarla.



  34. hola, estoy realizando mi tesis y necesito calcular las proteinas de la leche en polvo que obtengo despues se secar por aspersion, lo que pasa es que el volumen del acido clorhidrico que se gasta es muy pequeño y el contenido de nitrogeno me da muy bajo, la normalidad del acido es de 0.1

    • Buenos días.
      En principio debería asegurarse de que los equipos utilizados funcionan correctamente realizando las pruebas de recuperación con Acetanilida y Amonio Sulfato.
      Si todo es correcto, revisar la cantidad de NaOH añadida en la destilación. Si comprueba que la cantidad añadida es suficiente revisar el proceso de digestión.



  35. Excelente pagina, sigan así es de mucha ayuda para los que estudiamos físico-química !!!

  36. Hola , quisiera saber por que se me produce una reaccion violenta durante la destilación, estoy determinando N en fertilizante UREA, pienso que estoy agregando demasiado NaOH (100 ml al 50 % p/v) o no estoy agregando suficientes perlas de vidrio (agruegue 30 )


    • Buenos días. El NaOH que agregas en la destilación tiene que estar en exceso. Podrías hacer un cáculo estequiométrico para saber aproximadamente cuanto necesitas en función de la cantidad de ácido sulfúrico que añades para la digestión.
      Por otro lado, después de la digestión se añade agua a las muestras digeridas, esto diluye el resto de ácido sulfúrico de la digestión. Es posible que añadas poca y por esta razón la reacción es tan violenta cuando añades el NaOH en la destilación.


  37. Excelente pagina, los comentarios y respuestas son muy validas. Tengo una interrogante, un método Kjeldahl usa blanco y la titulación con NaOH 0.1 N, recibe el amoniaco en 50 mL de ácido clorhidrico 0.1 N. El volumen del blanco es mayor que de la muestra y me parece raro. Ademas las muestras son concentradas de frijol y los valores obtenidos son menores a las determinadas por otro laboratorio.

    • Hola buenas tardes.
      No tenemos demasiados datos para contestar la pregunta. Lo que está claro es que el blanco debería ser inferior a la muestra. De hecho el resultado de la muestra debería ser la suma de el valor real más el blanco.
      Si el valor del blanco es superior probablemente hay algún error en el procedimiento.
      Si nos proporciona más datos sobre el procedimiento intentaremos ayudarle.


  38. Buen dia, me facilitan un correo para solicitar presupuesto de dicho equipo, desde ya gracias.

  39. Saludos, al momento de enfriar las muestras despues de la digestion para proceder a destilar, estas se gelatinizan, cual es el motivo? Estoy determinando proteina el leche en un micro kjeldahl, usando 3ml d muestra, 10ml de H2SO4, 1 tableta catalizadora, 5gr de potasio sulfato y perlas de ebullición, con 3 rampas de 150 C por 120 minutos, 270C por 60 minutos y 400C por 60 minutos, ademas al momento de la destilación, que cantidad de NaOH, y H2O me recomiendan dispensar, asi mismo que tiempo para la destilación, a la espera de sus comentarios

  40. Buenas,

    Cuando calculo el % de recuperación

    Como me aseguro que la Acetanilida 100 % pura ?

    Lo mismo para el SO4(NH4)2

    Muchas Gracias

    • Buenos días.
      Normalmente tanto la acetanilida como el amonio sulfato no son puros al 100%.
      Lo que ocurre es que la aproximación es válida ya que su pureza, si se compran éstos reactivos para usarlos como patrones, suele ser superior al 99.5 %.
      En todo caso si desea hacer un cálculo más exacto, en la etiqueta del reactivo, indica la riqueza mínima y con ella calcular la incertidumbre del resultado obtenido en sus pruebas.

  41. Buenos días, buena información. Lo que deseo saber es el tratamiento preliminar de la muestra en caso de que se trate de material vegetal como por ejemplo la alfalfa. Desde ya muchas gracias.

    • Pienso que Conviene antes determinar la humedad de la muestra para poder luego expresar los resultados analíticos sobre la base de la materia seca.


    • Buenos días. En principio no hay ningún tipo de tratamiento preliminar para muestras vegetales. En todo caso, para un tipo de muestra concreta, debería consultar si hay alguna norma que aplique y si en ella se hace referencia a algún tratamiento.


  42. Buen día

    Durante la destilación a través de un equipo tradicional Kjedahl por que cuando neutralizas y los primero minutos burbujea NH3 en la solucion de acido borico y despues cuando ya levanto temperatura cae NH3 liquido en la solucion de acido borico. Muchas gracias

  43. hola acabo de hacer una practica de determinacion de proteinas en la leche por el metodo de kjedhal y el resultado que obtuve yo al hacer los calculos con unas formulas que nos dio la maestra es muy alegado del resultado que deberian tener……..creo deberia de haber salido un valor cercano a 3.2% y yo obtuve 7.82%…. creo que hice algo mal
    los datos son los siguientes:
    el volumen de muestra fue 10 ml, el volumen del blanco fue 1ml, se utilizo HCl 0.1 N para titular, la muestra en gramos son aprox 10.32 g, el volumen de HCl consumido fue 1.1 ml, el factor de la leche es 6.38
    podrias decirme como se hacen los calculos correctamenrte

  44. muy bueno gracias !!

  45. Buenas tardes,

    Me realizaron unas evaluaciones del contenido de proteína en pectina de nopal y resultaron muy altas del 30% cuando deberían ser del 3 %. Al analizar la formula para determinar el % de N, utilizaron un peso equivalente del N de 14, para una muestra en gramos, no se si se tenga que aplicar un peso equivalente de 1.4007 como en algunos casos que he revisado.

  46. Estimados, Buenas Tardes!
    Por favor me podrían ayudar con la información sobre que proveedor ofrece en Bolivia los 2 reactivos (amonio sulfato y acetanilida).
    Por otro lado cuales serian las características de cada reactivo, como ser: la calidad de pureza que debe tener, si es grado p.a. o comercial, etc.

    Por favor necesito su ayuda, porque necesito validar el método para determinar la proteína.

    • Buenos días .
      Sentimos no poder ayudarle. Desconocemos los proveedores de reactivos de Bolivia.
      Sin embargo son dos reactivos muy usuales y a parte de la marca Panreac que nosotros referenciamos podrá encontrarlos de otras marcas .
      Con respecto a la pureza debe ser para análisis ya que comercial podría contener impurezas que interfieran en los resultados.

      • Muchas gracias por su respuesta.

        Pero realizando los ensayos me surgieron las siguientes interrogantes:
        - Para una muestra de 0.5gramos de harina de soya, cuanto de ácido sulfúrico al 97%, debería adicionar para tener una buena digestión?. Nosotros en base a como venían trabajando adicionamos 10ml y para grano de soya 1 gramos de muestra y 15ml de ácido. Estaría bien el volumen de ácido sulfúrico para el peso de las muestras?
        - En la etapa de destilación utilizamos el Hidróxido de sodio a 40ºBe; la pregunta es: si da lo mismo utilizar 40ºBe o 40 % NaOH?. Al variar la concentración del NaOH a 32% afectaría al resultado final?
        - Para calcular el porcentaje de la proteína, por el método determinamos un blanco y para el cálculo final restamos el volumen gastado de HCl 0.1N en el blanco al volumen gastado en la muestra. La pregunta es: si está bien restar el volumen del blanco o debemos sumar el volumen del blanco al volumen de la muestra?.
        De antemano estoy muy agradecida.

        • Buenos días,

          Con respecto a la cantidad de Ácido sulfúrico pensamos que es correcta.

          Con respecto a la concentración de NaOH que utilizan en la destilación pueden utilizar la que deseen teniendo en cuenta que el volumen que deben añadir tiene que ser suficiente para neutralizar el resto de ácido sulfúrico de la digestión y estar en exceso para reaccionar con el sulfato de amonio que se ha formado. Por lo tanto, si por ejemplo necesitan 30 ml de NaOH 40 % y quieren utilizar NaOH 30% deberán añadir una cantidad superior. Con un cálculo estequiométrico podrían calcular la cantidad exacta.

          Con respecto al cálculo de la proteína, es correcto restar el volumen gastado en el blanco. Éste volumen es el necesario para neutralizar las “impurezas” de los reactivos. Cuando valoran una muestra están valorando el nitrógeno de la muestra junto con las impurezas de los reactivos.


          • Buenos Días!
            primeramente agradecerle muchísimo por su ayuda incondicional.
            Como segundo, comentarle que ya me llego los 2 reactivos (amonio sulfato y acetanilida).
            Ahora me piden hacer la razón de recuperación en todas las etapas con acetanilida y con sulfato de amonio en la destilación.
            Donde me nacen las siguientes interrogantes para realizar el ensayo:
            1.- Que cantidad de masa de acetanilida para una verificación completa?
            2.- Qué cantidad de sulfato de amonio debería pesar para verificar la etapa de destilación?
            3.- El sulfato de amonio se debe disolver con agua destilada antes de colocar al destilador en el mismo tubo macro o en otro recipiente, si es así que cantidad agua se requiere para disolver?

            Mencionarle que para la valoración nosotros utilizamos HCl de concentración 0.1N.

            Sin mas que agregar, me despido muy agradecida por el apoyo brindado.

          • Buenos días. Nosotros aconsejamos estos valores pero se puede hacer poniendo patrones cuya cantidad de nitrógeno se asemeje lo mas posibles al tipo de muestra si es que lo conoce.
            Normalidad – Muestra de sulfato de amonio.
            0,05 – 20 … 40 mg
            0,1 – 40 … 90 mg
            0,25 – 100… 200mg
            0,5 – 200… 400mg
            Para la acetanilidad las cantidades que contengan aproximadamente el mismo nitrógeno.
            El agua en que diluimos al sulfato de amonio se debe añadir en el tubo de destilación para evitar pérdidas.


  47. Muy buen trabajo,
    Como puedo saber cuanta muestra utilizar de queso:
    La tecnica semi-micro kijeldahl está diseñada para determinar 2 a 3 g de nitrógeno; para cumplir con esta condición; ¿Cuanto deberá pesarse de una muestra de queso si se supone que la misma tiene alrededor de 28% de proteina?

    • Buenos días.

      Supongamos que utiliza un factor (F) de 6.25 para el cálculo de la proteína.
      Si su muestra tiene un 28% de proteína (P) tenemos %P = F x % N Si ahora aislamos el % de nitrógeno % N = %P / F es decir %N = 28 / 6.25. %N = 4.48 % N
      Así sus muestra tiene un 4.48% de nitrógeno. Es decir 100 mg de muestra tendrá 4.48 mg de nitrógeno.

  48. Me ayudó mucho…

    Tengo %humedad =10%, %Ps = 8.61, muestra=2000mg, HCl=21.1ml 0.1N; si le cambio a 35% de humedad, como se cuanto HCl voy a necesitar?

    • Buenos días Ximena.

      No entendemos muy bien la pregunta. ¿Podría plantearla con un poco más de detalles por favor?



  49. Hola muy buen día!
    ¿Quisiera saber si me podrían ayudar?
    Tengo ciertos problemas al desarrollar el análisis de mis muestras, ya que si bien los resultados que estoy obteniendo no corresponde a los teóricos y no se que es lo que me puede estar afectando.
    Dependiendo de la muestra peso la cantidad de muestra necesaria, le agrego un cuarto de pastilla de catalizador, alrededor de 12-15mL de ácido sulfúrico y procedo con la digestión, el residuo de la digestión posee un color verdoso claro similar al de la pastilla de catalización, posteriormente le hago la digestión y para ello empleo 70mL de NaOH al 35%, y como valorante estoy utilizando ácido sulfúrico 0,02N (estandarizado) y empleo la mezcla rojo de metilo y azul de metileno como indicador (el cambio del viraje es claro y fácilmente detectable).
    Pues si bien monte un patrón de acetanilida siguiendo sus lineamientos y mi porcentaje de recuperación fue del 10% y no se que pueda estar fallando que me esta afectando mis análisis.
    De antemano les agradezco mucho su ayuda!

    • Buenos días.
      En primer lugar le aconsejamos que realice la prueba de recuperación con sulfato de amonio para verificar el funcionamiento del destilador y el valorador. Una vez comprobado, si los resultados siguen siendo incorrectos, envíenos los valores de peso de acetanilida y volumen de sulfúrico consumido en la valoración.

  50. Buen dia,

    Quisiera consultar como saber hasta cuanto NaOH hay que agregar para neutralizar antes de destilar. La digestión la realizo con 20 ml de ácido sulfúrico y la neutralizacion con NaOH al 45 % , Gracias

    • Hola , para estar seguro de que añade la suficiente NaOH sólo tiene que hacer un cálculo estequiométrico.
      Parte de 20 ml de H2SO4 de riqueza R % y densidad DH g/ml
      MM H2SO4 = 98.08 g/mol
      MM NaOH = 40.00 g/mol
      NaOH 45 %
      Desnsidad del NaOH 45 % = DNa g/ml

      20 x DH = gramos de solución H2SO4 que quieres neutralizar = G0
      G0 x R = Gramos de H2SO4 que queremos neutralizar = GH
      GH x 98.08 = Moles de H2SO4 que queremos neutralizar = MH
      H2SO4 + 2 NaOH < => 2 H2O + Na2SO4
      Por lo tanto necesitamos 2 moles de NaOH para neutralizar un mol de H2SO4.
      2 x MH = Moles de NaOH que necesitamos = MNa
      MNa / 40.00 = Gramos de NaOH que necesitamos = GNa
      GNa / 45 = Gramos de solución NaOH al 45 % que necesitamos = G1
      G1 / DNa = Volumen de disolución NaOH 45% que necesitamos.


      • Muchas Gracias

      • para calculare los moles de acido sulfurico no hay que dividir los gramos de acido sulfurico por 98,08 ?


        • “Buenos días.
          Pues no lo sabemos, tendría que ser más especifico. ¿Se trata de calcular el número de moles a partir de una disolución?
          ¿Está hablando de riqueza o de normalidad?…

          Si a lo que se refiere es a calcular el nº de moles a partir de la masa molecular del ácido sulfúrico, efectivamente.
          La masa molecular es 98,079 g/mol.

  51. Buenos días;
    Quisiera ver si me pueden ayudar con una consulta.
    Durante la destilación tengo el problema de que parte del ácido bórico contenido en el erlenmeyer receptor, se proyecta hacia el balón, (como si el balón succionase el ácido), estropeando todo el ensayo. Cual puede ser el motivo?

    • Hola
      Podría ser debido a que en algún momento se interrumpe la generación de vapor y al enfriarse el generador de vapor hace el vacio succionando el bórico.
      De todas formas necesitaríamos más información sobre el equipo de destilación que utiliza para poder determinar dónde está el problema.

      • Hola;
        Ante todo, muchas gracias por responder.
        Estoy trabajando con un equipo macro tradicional. Los balones los coloco en mantas calefactoras para realizar la destilación y estos están conectados al condensador. Caliento las mantas antes de colocar los balones, y los mismos los coloco a temp ambiente. (También he probado comenzar con las mantas frías). En ningún momento interrumpo el calentamiento. Ya no se que mas probar.

        • Hola Buenos días.
          Pues si es así no se que decirle. Todo indica a que por alguna razón, el contenido del balón pierde temperatura, se hace el vacío en él y absorbe el ácido bórico del erlenmeyer pero no sabemos a que es debido.
          Siento que no podamos ayudarle más.


  52. Buen día!!

    Mi duda es ¿Las muestras a analizar se deberán desengrasar previamente para realizar la determinación de proteínas? Si o no y ¿por qué? o ¿sólo determinar su humedad?

    Manejaré frijol, soya, arroz integral y lenteja.


    • Hola Buenos días.
      No, en principio no se debe estraer la grasa ni tampoco la humedad. Sencillamente pesar la muestra y pasar al proceso de digestión. Este proceso tendrá diferentes tiempos y diferentes temperaturas que dependerán del tipo de muestra. El agua (humedad) y la grasa se eliminan en este proceso .

      ¿Por qué? Porque queremos saber la cantidad de proteína sobre el producto sin tratar. Si extraemos primero la humedad y después pesamos tendríamos la proteína sobre el producto seco.


  53. Hola disculpe es un buen trabajo pero si usamos la muestra del cacahuate (Maní) como seria la formula… y el valor de las proteínas

  54. Hola buenos días. La formula seria la misma. El factor de proteínas es 6.25 para alimentos en general. Por lo que tenemos entendido para cacahuetes seria 5.41.


    • Hola buenos días. La formula seria la misma. El factor de proteínas es 6.25 para alimentos en general. Por lo que tenemos entendido para cacahuetes seria 5.41.

  55. Hola buenos días: estoy utilizando tubos de ensayos de 100 ml para los procesos de digestión. Las muestras son de 3 g y el gramaje del catalizador es de 1 g, al terminar el proceso de digestión obtengo muestras de color azul/celeste muy claro.
    Mi problema es en la destilación en donde utilizo un indicador mixto de verde bromocresol y rojo de metilo al 0.2% en relacion 5:1. Al matraz Enlenmeyer le agrego 20 ml de ácido bórico y 5 gotas del indicador, la muestra adquiere un color rojo claro y al introducirlo en el vapodest 20s se deberia tornar a un color turquesa pero queda del mismo color rojo claro….¿cual seria el problema?

    • Hola buenos días. Parece que no consigue extraer el nitrógeno de la muestra. Podría ser por la cantidad de NaOH que añade en la destilación. Le aconsejamos que pruebe a hacer una destilación con un patrón , por ejemplo amonio sulfato. Si todo va bien, cuando realice una muestra, añada más cantidad de NaOH.
      Para saber si el NaOH está en exceso (necesario para que el análisis funcione), calcule la cantidad necesaria para neutralizar el ácido sulfúrico que añadió para la digestión y añada 10 ml más de esa cantidad en la destilación.


  56. Hola buenos dias. Estamos utilizando vuestro equipo Kjedldahl, con excelentes resultados para harina de garrofin. Hasta ahora hemos usado una pastilla catalizadora de 3.6g de 95.2% de K2SO4 y 4.8% HgO de Panreac. Este catalizador ya no se fabrica y pensábamos usar el que nos recomendais 8g de 6.25%Cu.

    Nos va a afectar el cambio en el proceso de digestión?


    • Hola buenos días.

      En principio no debería afectar. Únicamente tener en cuenta que las cantidades que se deben añadir son diferentes. Está especificada en el manual de usuario

  57. realizando la verificación con un patrón de glicina, obtuvimos una recuperación de nitrógeno muy alta… Que pudo pasar??

    • Hola buenos días.
      Normalmente, una alta recuperación es debida a contaminación de los reactivos, normalidad del ácido utilizado errónea o un error de cálculo


  58. Saludos

    Primero que todo gracias por la información, es muy completa y de gran ayuda.

    Yo tengo que realizar el método de Kjeldahl para cuantificar proteínas en un caldo, pero tengo problema de que al ser líquido pues quizás deba modificarlo con la adición de una columna para recuperar los compuestos nitrogenados y luego continuar como dicta el proceso.

    Aun no lo he realizado***

    Alguna sugerencia adicional?

    • Hola Mara.

      No tenemos constancia de que exista una norma específica para determinación de proteínas en sopa. Si fuera así deberías seguir esta norma.
      Si no es así, en principio el proceso es el mismo que para cualquier otra muestra. Ten en cuenta que al ser líquido el primer paso de la digestión destinado a evaporar el agua de las muestras tendría que ser algo más largo. En nuestra web en general ponemos:

      1. En función del contenido de agua de la muestra, empezar la digestión evaporando agua a 150ºC entre 15 y 30 minutos.
      Para una muestra de 100 ml podría poner 60-90 minutos por ejemplo.

      A parte de eso el mismo proceso como le comentaba.


  59. si el factor de conversión de nitrógeno a proteina es 6.25 en soya es 5.71

  60. Buenas Tardes: ADMIN

    Para sacar un resultado rápido de proteína: puedo utilizar lo siguiente, humedad del trigo
    por factor 0.865.- Esto es para obtener un resultado aprox. hasta analizar.- Es posible??

    • Hola buenas tardes.
      Sentimos mucho no poder ayudarte pero desconocemos si existe algún tipo de aproximación como ésta a la que haces referencia.


  61. hola buenas tardes. Quiero felicitarlos por la información aquí publicada, está muy completa y muy bien explicada.

    Con base en esta información necesito analizar 3 aspectos

    1. ¿puedo determinar el N en urea con este método?
    2. ¿porque este método no identifica el N proveniente del NO3?
    3. desde el punto de vista nutricional, ¿porque la información obtenida con este metodo es mas efectiva para rumiantes que para monogastricos?

    Espero que me puedan ayudar, Gracias.

    • “Hola buenos días.
      Sí, se puede utilizar este método par la determinación de N en urea.
      Con respecto a la segunda pregunta, tanto nitritos como nitratos no forman amonio sulfato durante el proceso de digestión y por lo tanto no se determinan en la posterior destilación.
      A la tercera pregunta no sabemos responderte.

  62. Hola.
    Estoy haciendo un analisis de contenido de proteinas mediante el metodo kjendal, pero mis muestras (aislado proteico) se queman, se tornan de color negro. Utilizo la muestra (0.3 g), mezcla catalizadora (1.5 g) y acido sulfurico (3.5 mL). Espero su respuesta. Gracias

  63. Hola, descubri esta pagina y la encontré genial muy explicativa me gusto mucho.
    Estoy determinando proteína en leche en polvo, sueros lácteos y sustitutos lácteos; en los ultimos analisis mis resultados han sido menor a lo esperado. Utilizó un catalizador preparado en una relación de 1:10. Mi consulta es si los lácteos tienen un tiempo mayor de digestión que el resto de los alimentos ; el tiempo que utilizo es de 4 hrs y cuales pueden ser mis puntos críticos con esta matriz?? Afecta la humedad de la muestra como para trabajarla en base seca??’

    • “Hola buenos días. Por lo que entendemos han tenido buenos resultados hasta ahora y en los últimos han empezado a notar menor recuperación.
      No parece que sea un problema del protocolo que utilizan ya que si hasta ahora había ido bien…
      Creemos que deberías revisar los reactivos que utilizas, que no estén contaminados, que las concentraciones sean correctas,… un pequeño error en la concentración del ácido de valoración puede provocar este tipo de “perdidas”.
      Y comprobar que el equipo de destilación no tiene fugas. Esto lo pueden hacer utilizando un patrón de sulfato de amonio por ejemplo.

      Con respecto a los tiempos de digestión, probablemente los lácteos necesiten un tiempo más largo que un cereal pero más corto que una carne. De cualquier manera, como decíamos al principio si con el protocolo utilizado hasta ahora había obtenido buenos resultados le aconsejamos que busque la fuente de las perdidas en otras partes del proceso.
      Y respecto a la humedad de las muestra, para la digestión es imprescindible eliminar completamente toda el agua , por eso aconsejamos en el proceso de digestión un primer paso entre 150 – 165 ºC (en nuestros equipos en otros tal vez sean diferentes)
      Cuando continuamos con el proceso, si la muestra aun contiene agua, al intentar elevar la temperatura se suelen producir pequeñas explosiones y ebulliciones violentas que pueden causar errores en la determinación.

      En resumen, si hasta ahora con el protocolo que utilizaban obtenían buenos resultados debería buscar el origen de estás perdidas en algún reactivo o en un fallo del equipo de destilación.

      • Hola Buenos dias, gracias por tu pronta respuesta.
        Hoy comenzaré a trabajar verificando mis reactivos y equipos para ver donde se encuentra mi fuga.quería hacer otra consulta para la titulación estoy utilizando Hcl 0.2 N, el lo preparo y lo estandarizo con Na2CO3; puedo usar Ác. sulfúrico 0.1 N titripac el cual ya viene estandarizado y asi tener su normalidad mas certera o su composición diferente afectaría mis resultados??Desde ya muchas gracias!!!!!

        • “Hola buenos días.
          Por supuesto que puede utilizar este reactivo. De echo nosotros aconsejamos utilizar todos los reactivos estandarizados hasta conseguir resultados correctos para descartar posibles errores en su preparación.
          Por otro lado puede utilizar tanto Ácido Sulfúrico como Clohídrico de la normalidad que mejor se adapte al proceso que realiza. El resultado de la valoración será el mismo. Sólo tiene que tener en cuenta la normalidad utilizada a la hora de realizar los cálculos.

    • Buenos días; estaba leyendo que hacen determinación de proteínas en lácteos y derivados. Quisiera saber si podrían facilitarme algunos datos como cantidad de muestra que utilizan de suero en polvo, wpc o concentrado de proteína en polvo y si varían las cantidades de reactivos.
      Yo utilizo 20 ml de ácido sulfúrico, 12 gr de sulfato de potasio 1 ml de slcion de sulfato de cobre, destilo con 10 ml de NaOH 30% y 200 ml de agua, recojo en ácido bórico 40% y titulo con H2SO4 0.1N. Desde ya, les agradeceré una respuesta

      • “Hola buenos días. No sabemos exactamente las cantidades ideales para cada tipo de muestra. Como norma general aconsejamos 1 gramo pero siempre se puede optimizar en función de cada tipo de muestra.
        Un buen procedimiento a seguir para definir qué cantidades de muestra nos pueden “ir bien” es partir de la normalidad del ácido que vamos a utilizar para la valoración.

        Por ejemplo, en su caso nos comenta que utiliza ácido sulfúrico 0.1 N.
        En nuestro equipo automático (PN-A) aconsejamos un consumo de ácido para la valoración entre 6 y 12 ml para obtener una resolución suficiente que minimice la influencia de los errores absolutos y un consumo de ácido no muy elevado para optimizar el tiempo de destilación.
        En este caso sería ideal muestras que contuvieran entre 8 y 17 mg de Nitrógeno. Así se podría adaptar el peso de la muestra a esos contenidos de Nitrógeno. En el caso de un patrón de amonio sulfato pesaríamos entre 38 y 80 mg .
        Si usted decide que el consumo de ácido ideal para su manera de trabajar debería ser otro, por ejemplo entre 10 y 20 ml podría realizar el mismo cálculo. Sus muestras deberían tener entre 15 y 29 mg de Nitrógeno.

        Con respecto a los reactivos utilizados tampoco hay un criterio absoluto. Sencillamente en algunos reactivos como el ácido sulfúrico de la digestión nuestra propuesta es comenzar con una cantidad suficiente y una vez obtenidos buenos resultados ir reduciendo esta cantidad de manera progresiva para optimizar el coste del proceso.
        En su caso utiliza 20 ml, nosotros aconsejamos entre 15 y 20 ml pero nos costa que se realizan ensayos con cantidades inferiores, del orden de 5 ml obteniendo buenos resultados. Tenga en cuenta que el ácido sulfúrico debe ser suficiente para realizar la digestión completa de la muestra (por lo tanto en exceso) pero que el resto de ácido de la digestión se tiene que neutralizar con hidróxido de sodio para la destilación y por lo tanto a más ácido sobrante más consumo de hidróxido.

        A parte de todo esto, si usted ya realiza el ensayo con buenos resultados, nuestro consejo es modificar lo mínimo posible. En todo caso puede probar a reducir la cantidad de muestra, o de alguno de los reactivos para intentar optimizarlo si es posible.


  64. Otra consulta es si tengo muestras que poseen gran cantidad de grasa, debe tener algún tratamiento especial con la muestra?

  65. Buenas tardes … mi pregunta es la siguiente . Si usamos en la digestión ácido sulfúrico que aparentemente esta contaminado X que presenta una coloración café claro no se cual es el factor X que se compro una que estaba de color transparente y al almacenarlo encontramos de ese color. . Será que ese ácido aún sea usable para la digestión?

    • ” Hola buenos días.
      No lo sabemos.
      Puede probar y realizar una prueba con patrones de acetanilida y decidir en función de si el resultado es correcto o no.

  66. Buenas tardes,
    Tengo que realizar unas pruebas con un destilador Pronitro I algo antiguo, pero que parece que funciona perfectamente.
    ¿Puedo utilizar Sulfato férrico amónico dodecahidrato ( NH4Fe(SO4)2·12H2O ) como patrón para verificar la destilación?, si es así, ¿cuáles serían los cálculos?
    Es por saber si puedo adelantar en vez de pedir el Sulfato de amonio.
    Muchas gracias

    • “Hola buenas tardes.
      Nosotros no hemos hecho nuca esta comprobación sin embargo he consultado con algún laboratorio colaborador nuestro y nos han asegurado que es posible.
      Lo único que debe tener en cuenta es que para calcular el Nitrógeno teórico, es decir la cantidad de Nitrógeno que tiene su patrón no puede utilizar las formulas que tenemos en la web. Debe utilizar el peso molecular del NH4Fe(SO4)2·12H2O .

      • Buenas tardes de nuevo,
        Muchas gracias por la respuesta, finalmente hice las pruebas y todo parece correcto, con unos porcentajes de recuperación buenos.
        Por otro lado, a la hora de utilizar muestras “reales” se gelatiniza el resultado de la digestión. Tras diluir con agua (25 ml) y debido al calentamiento, vuelve al estado líquido, pero con algún tipo de residuo blanquecino. Al realizar la adición de NaOH el color no es azul sino marrón oscuro, aunque parece que los datos obtenidos no son extraños. Las cantidades son 1 g de muestra, 10 ml de H2SO4 y 8 g de catalizador.
        Muchas gracias por adelantado a cualquier aclaración.

        • “Buenos días.
          En principio todo lo que nos explica sobre la gelatinización de las muestras reales , el color, etc. es normal.
          Y según nos dice los resultados son los esperados, así que no tenemos que hacer ningún comentario más.
          Muchas gracias a usted.

  67. buena tarde estimados,
    tengo una consulta con respecto a la digestión, el producto final de este proceso debe ser un liquido totalmente transparente, sin residuos.
    porque en este proceso tengo el problema que me queda residuo en los tubos de ensayo. los tiempos que estoy dando son los siguientes: 150 °C (15 minutos), 300 °C (15 minutos) y por ultimo 400°C (60 minutos).

    • “Hola. Además del tiempo de digestión que parece correcto debería revisar la cantidad de catalizador y la cantidad de ácido sulfúrico. Exceso de catalizador o defecto de sulfúrico pueden producir esta digestión incompleta.
      De cualquier manera, el resultado de la digestión debe ser un liquido transparente pero en ocasiones aparecen una mínima cantidad de residuos y sin embargo la digestión ha sido completa. Para explicarlo de alguna manera podríamos decir que si el residuo observado es inferior al 1% probablemente la digestión sea completa.
      Espero que esa le sirva de ayuda.

      • buen día, estoy agregando 20 ml de ácido sulfurico y una pastilla de catalizador, estoy tomando 1 gramo de muestra.

        tienen algunos parametros del proceso de digestion para Harina de trigo

        • “Hola.
          En principio tanto la cantidad de muestra como de ácido sulfúrico parecen correctas.

          Si está utilizando el catalizador al que hacemos referencia, (Catalizador Kjeldahl 6.25% Cu tabl. 8g PANREAC 174428)
          Una tableta será suficiente, sin embargo nos consta que se comercializa este catalizador en otros formatos. Asegúrese de que el peso es de aproximadamente 8 gramos.

          Si utiliza otro catalizador debería consultar biografía para conocer la cantidad necesaria.
          También podría probar a reducir la muestra a la mitad 500 mg. Un exceso de muestra podría provocar también una digestión incompleta.


          • buena tarde estimad@s,

            cuando realizo el proceso de destilación el producto final se tiñe color rosa, con este color obtenido no puedo realizar la titulación con ácido.

            sera problema de la digestión.

          • “Buenos días.
            Tendría que darnos más datos.
            ¿Podría decirnos de manera resumida el proceso que sigue?
            Cantidades de muestra y de reactivos , tiempos y reactivos utilizados.
            ¿Qué indicador está utilizado?

          • buen día estoy utilizando un catalizador Kjeltec,

            3.5 g K2SO4
            0.4 g CuSO4 X 5H2O

            cuanto necesitaría para poder realizar la digestión.

          • “Buenos días.
            Nosotros utilizamos normalmente 8 gramos catalizador distribuido por PANREAC que contiene un 6.25% de CuSO4 X 5H2O.
            En su caso parece que el contenido es aproximadamente 10.25% de CuSO4 X 5H2O.
            Puede hacer el cálculo de lo que necesita para obtener una cantidad equivalente, aunque no tenemos la certeza de que el comportamiento de la reacción sea lineal ya que añadiría menos cantidad de K2SO4.

  68. Hola que tal, realizo una investigacion con residuos alimenticios, realizare determinacion de proteina, la muestra colectada esta muy liquida, es conveniene realizarse asi o es importane secar. gracias

    • “Hola buenos días.
      Para muestras líquidas o con un gran contenido de agua se aconseja realizar un primer paso de la digestión más largo para poder evaporar todo el agua antes de empezar el proceso de digestión propiamente dicho.
      Trate su muestra como si se tratara de agua. Podría programar un primer paso de digestión de 90 minutos para asegurarse de que el agua se ha evaporado completamente y a partir de aquí seguir el proceso normal.

  69. Hola me puedes ayudar por favor ultimamente no me esta saliendo el valor de la acetanilida que uso como patron en mis analisis de nitrogeno total doble digestion.
    el peso es de 0.3 y 40 ml de acido sulfurico puro,acido salicilico y tio sulfato de sodio catalizador 7.5 d sulfato de potasio y 0.4 gr oxido de mercurio el tiempo de digestion es una hora 45 min, luego se agrega 50 ml de agua y se destila con soda al 50% mas tiosulfato.. a veces al pasar la soda y se mezcla con la muestra lo q obtengo es una muestra blanquinosa no transparente.. mi recolector es acido sulfurico al 0.25N Y mi titulante es NaOH AL 0.25N

    • “Buenos días.
      Cuando dice que últimamente no le sale el valor de acetanilida ¿qué quiere decir?
      ¿Le salen valores inferiores a lo esperado o superiores?
      ¿Hasta ahora le salían valores correctos y de repente no?
      ¿Ha cambiado algún reactivo, algún parámetro del proceso o algún equipo?
      Sin esta información no sabríamos que decirle.

  70. hola
    disculpa cual es el origen del factor de conversión?

    • ” Hola buenas tardes.
      Supongo que se refiere al factor de conversión de nitrógeno a proteína.
      Se utiliza un factor porque con el método Kjeldahl determinamos la masa de nitrógeno pero las proteínas están formadas por más componentes.
      Multiplicar la masa de nitrógeno por el factor nos proporciona una aproximación de la masa de las proteínas.

  71. Hola ! Quisiera consultar que pasa si destilo mas volumen del que agregue de agua destilada , existe algun riego de error ?

    Muchas Gracias

  72. Hola! Quería preguntarles que tiempo de almacenamiento tiene el indicador mixto.

    • “Hola buenos días.
      Si lo compra preparado lo debería indicar el fabricante en el etiquetado.
      En nuestro caso, utilizamos PANREAC y está indicado en el punto señalado con “9″ de la imagen adjunta.
      Si lo preparan deberían decidirlo ustedes.

  73. Excelente página, por lo didáctica y experiencia de los administradores. Me gustaría algún comentario sobre el señalamiento de que la inclusión de nitrógeno no protéico es una posible fuente de error.
    Pregunto: Cómo podría la presencia de una pequeña cantidad de nitratos afectar el resultado? Si no lo afecta, parece que la única precaución es indicar que el método determina sólo nitrógeno protéico (u orgánico)

    • “Hola buenos días.
      En principio nitratos o nitritos no afectarían a los resultados. Sin embargo, existes otros compuestos orgánicos no proteicos como aminoácidos libres, péptidos pequeños, ácidos nucleicos, fosfolípidos, aminoazúcares, porfirina, algunas vitaminas, alcaloides, ácido úrico, urea, iones amonio, etc. que sí influyen
      Si desea información más detallada le aconsejamos que consulte bibliografía especializada.

  74. Muchas gracias me gusto esta informacion es muy util se les agradece

  75. Hola. Buenísima información
    Estoy determinando proteína en harina de soya, que normalmente suele darme un resultado de 50% de proteína. Pero la última vez me salió un resultado de 91%, ¿Como sería posible que tenga tanta cantidad? Cual pudo ser el error?
    Mi peso de muestra es de 0,5 gramos + 10g de catalizador + 20 mL de Acido sulfúrico. En la destilación todo parece normal también.

    • Hola buenas tardes.
      La posibles fuentes de error son muchas, desde un error en la pesada, hasta una valoración con ácido incorrecto, contaminación de algún reactivo.
      Nuestro consejo es que realice pruebas en primer lugar con el destilador y un patrón de amonio sulfato para descartar mal funcionamiento.
      Está indicado en esta web en el apartado
      Si todo es correcto realice la


  76. Hola buenas tardes, estoy realizando determinación de proteína total en albúmina humana al 20%, mi método es adicionar 21.89 mcl de muestra por la cantidad de proteína contenida en ésta que es de 200 mg, esto para tener un gasto de 5ml de sol titulante que es H2SO4 0.01N , le adiciono 1 g de mezcla catalizadora preparada con sulfato de cobre pentahidaratado y sulfato de potasio 1:10, 7 ml de H2SO4 GR , 1 ml de peróxido de hidrogéno al 30% se somete a digestión por una hora obteniendo la coloración esperada( azúl claro), una vez digerido se destilan adicionando 15 ml de agua, 60 ml de NaOH 40% se destilan alrededor de 100 ml en 20 ml de acido bórico al 4% y se titula con acido sulfúrico 0.01 N, lo esperado son alrededor de los 200 mg de proteína por ml pero se obtienen aproximadamente 300 mg, muy alto para nosotros, realizándolo con un control el cual igual me sale alto; qué es lo que tendría que modificar ya que son muestras analizadas con otro método diferente y se obtienen los 200 mg esperados, mi duda es si alguno de los reactivos adicionados se deben modificar en volumen o la solución titulante deba ser otra concentración. Agradezco su comentario y ayuda.

    • “Hola buenos días. Es difícil hacer un diagnostico sobre lo que puede estar ocurriendo sin tener los equipos y los reactivos delante y observarlos.
      Pensamos que debería comenzar por hacer pruebas con un patrón de amonio sulfato simulando la muestra de albumina (es decir si en una muestra espera encontrar 100 mg de nitrógeno preparar patrones de amonio sulfato con aproximadamente esa misma cantidad) y utilizando los mismos reactivos comprobar el funcionamiento del equipo de destilación.
      Si el resultado no fuera el esperado ir comprobando los reactivos uno a uno hasta localizar el error.
      En el caso de que el resultado fuera aceptable hacer la misma prueba pero con acetanilida para incluir también la digestión.

  77. Tenemos un bollo de pan de leche y no sabemos por que factor de transformación hay que multiplicar nuestro porcentaje de nitrógeno. Podrías decirnos cual es el factor de transformación de la bollería?

    Muchas gracias

    • “Hola buenos días. Debería consultar la norma que aplica a ese producto concreto, en ella se debe indicar cúal es ese factor.
      Nosotros no disponemos de dicha norma.

  78. Buenos días tenemos un Block digest de 12 tubos Microkjeldahl y un Destilador Pronitro M y tenemos el procedimiento para determinara N total por Macrokjeldahl, es el mismo procedimiento en cuanto a cantidad de muestra y cantidad de reactivos a utilizar en el Micro, si no es asi podria enviarnos el procedimiento completo para N total en Microkjeldahl? Gracias

    • “Hola buenos días. El proceso es igual, las cantidades de muestra y reactivos no, son diferentes al trabajar con el bloque micro.
      Muestra: poner aproximadamente 1/3 de la muestra que se pondría en el macro teniendo en cuenta que la cantidad de nitrógeno esperada debería ser superior a 5mg
      Añadir aproximadamente 5 ml de sulfúrico y 4 g de catalizador.

  79. Saludos cordiales y felicitaciones por el Buen trabajo el que realizan en favor de la educación, me gustaría saber si de pronto me pueden ayudar con el método de proteínas kjeldahl con el equipo vapodest 200. Gracias

    • Hola buenos días,
      En principio el método debería ser el mismo pero no sabemos si existe alguna particularidad ya que el equipo al que hace referencia es de otro fabricante y desconocemos su funcionamiento.

  80. Buenas tardes.
    Pregunta: el uso de los catalizadores es imprescindible?
    agradezco su atención y su valioso aporte a la formación técnica.

    • “Hola buenos días.
      El uso del catalizador modifica el punto de ebullición del ácido sulfúrico y de esta manera se acelera la reacción.
      En teoría se podría realizar sin catalizador pero seria más lenta (no tenemos constancia de que se haya hecho nunca)

  81. Buenas tardes necesito que me ayuden DE URGENCIA con la solución de un ejercio que no se como realizarlo
    Una muestra de leche en polvo indica que el porcentaje de proteína determinada por el método kjeldahl de 34%determine el % de proteína de la muestra de leche fresca a partir de la cual su obtuvo(considere que el contenido de agua en la leche fresca es del 88%)

    • “Hola buenos días.
      Utilizamos este Foro – Web para intentar dar respuesta a preguntas sobre procedimientos, equipos, errores en la determinación, etc. pero no tenemos demasiados conocimientos sobre problemas y ejercicios teóricos que le puedan plantear.
      Probablemente, observando los datos que le proporciona en el ejercicio, podrá encontrar la solución.
      Si no fuera así, tal vez algún lector de este foro le pueda indicar como solucionarlo o existan otros foros más apropiados a este tipo de preguntas.
      Sentimos mucho no poderle ayudar.

  82. En algunas muestras despues de la digestion en el fondo de los tubos se forma un precipitado que se disuelve al momento de adicionar agua para posteriormente pasar a la destilacion.
    No he encontrado alguna tendencia de este precipitado respecto a naturaleza de muestra.
    Saben a que pueda deberse?

    • “Hola , buenos días.
      El precipitado son las sales resultantes de la digestión. Al digerir la muestra toda la materia orgánica pasa a formar diferentes sales, entre ellas el sulfato de amonio que después determinaremos para calcular la cantidad de nitrógenos.

  83. Hola, una duda en el proceso de destilación, el equipo que utilizo es macro-kjeldhal, los tubos que van a los vasos de recuperación con el ácido bórico calientan mucho la solución, no estoy seguro que la conexión de carga y descarga de agua sea correcta…

    • “Buenas tardes.
      No entendemos muy bien la pregunta. Si se refiere a que cuando destila una muestra el destilado que se recoge en un matraz con el ácido bórico sale demasiado caliente. Es decir después de la destilación el matraz que ha recogido el destilado está muy caliente puede ser un problema de falta de caudal o de excesiva temperatura del agua del refrigerante. Aconsejamos un caudal mínimo de seis litros por minuto y una temperatura inferior a 20ºC.
      En otro caso, al salir el destilado demasiado caliente hay posibilidad de pérdida de nitrógeno.

  84. Buenas tardes,
    Estamos teniendo problemas para la determinación de nitrógeno total en UAN, tenemos un proNA e inicialmente pensábamos que sería un problema en la valoración.
    Después de leer su foro entiendo que es un problema con la digestión, ya que esta muestra contiene un 20% de agua. Durante cuánto tiempo y temperatura recomiendan la digestión en el bloque selects?.
    Si tuviesen el método completo de este tipo de muestras para la digestión, agradecería si nos lo pudiesen aportar

    • “Hola buenas tardes.
      No tenemos un método especifico para UAN. De hecho no sabemos qué quiere decir UAN.
      Tenemos un método general para muestras con alto contenido en agua que después podría adaptar al tipo de muestra que utilice.
      150ºC 250min.
      300ºC 30min.
      400ºC 90min.

      • Muchas gracias, cuando hablamos de UAN nos referimos a urea líquida, que tiene un 20% de agua y 32% de nitrógeno total, pero no solo ureico si no también nitrico y amoniacal.
        Probaremos con esta digestión, muchas gracias!

  85. Hola Buenas Tardes.

    Para la verificación del equipo con sulfato de amonio tengo una duda si podría aclarármela se lo agradecería, al momento de realizar la verificación utilizo HCl al 0.25N peso 100mg de sulfato de amonio y le agrego 25ml de agua destilada según el procedimiento, luego lo destilo agregando 15ml de NaOH mi pregunta es ¿solo se destila con NaOH? y otra duda es ¿debo agregarle el indicador al momento de valorar?

    De antemano espero su respuesta!


    • “Hola buenos días.
      Efectivamente, la reacción que transforma el sulfato de amonio en amoníaco está explicada en esta web junto con el resto de reacciones.
      En concreto en el apartado REACCIONES LLEVADAS A CABO EN EL METODO KJELDAHL (2)
      No nos consta que se pueda utilizar otra base diferente al NaOH pero no tenemos información al respecto.

      Con respecto al indicador es indiferente, puede añadirlo al ácido bórico antes de colocar el matraz para recoger el destilado o puede añadirlo después de destilar.
      Su única función es “indicar” con el cambio de color en qué momento debemos detener la valoración pero no afecta en la reacción entre el ácido bórico y el amoníaco
      Nosotros aconsejamos colocarlo previamente, de esta manera mientras se produce la destilación ya se puede observar el cambio de color .

  86. Hola Buenas tardes.

    Tengo un problema al momento de la verificación del equipo, ya que me dan resultados elevados. Ya preparé de nuevo las soluciones de NaOH al 40%, ácido bórico al 4% y HCl para valorar al 0.25N. Verifique los equipos, balanza, bureta, etc. Aún así me sigue dando resultados elevados en la recuperación de nitrógeno con sulfato de amonio. Mis cálculos son los siquientes: Para una muestra de 100mg de sulfato de amonio gasté un volumen de HCl (0.25N) de 16.1ml, es decir,
    P1= 100mg*0.212= 21.2 .. P2= 14*16.1*0.25= 56.3…. entonces el %R=(56.3/21.2)*100=265.56%… ¿Tendré algún error en los cálculos o mi problema podría ser otro? Espero su pronta respuesta.


    • Hola buenos días.
      En principio los cálculos son correctos, por lo tanto el error tiene que estar en otro sitio.
      ¿Está segura que el ácido de valoración es 0.25N? con un ácido 0.1N (también muy usual en estas valoraciones) el resultado sería aproximadamente de un 106% mucho más próximo a lo esperado.
      ¿Ha probado a hacer un ensayo en blanco y valorarlo?
      Esto le permitiría comprobar si tiene alguno de los reactivos contaminados.
      Otra cosa que ocurre en ocasiones es que debido a una destilación demasiado violenta, parte del NaOH que añadimos a la muestra, puede pasar al destilado y provocar este exceso de recuperación.
      De todas formas, si no encontrara la solución, puede ponerse en contacto con nosotros a través del tlf para que podamos ayudarle de una manera más directa.



  87. buenas tardes como hago el analisis de Urea presente en el queso una sugerencia utilizo un espectrofotometro donde se realiza los analisis bioquimicos de sangre o no se que otro equipo se podria usar gracias.

    • “Hola buenos días.
      Para la determinación de urea es usual utilizar el método Kjeldahl pero no es siempre el método oficial.
      En el caso de una muestra de queso podrá determinar el nitrógeno total Kjeldahl pero le aconsejamos que consulte la norma que aplica en la que le indicarán cual es el método oficial.
      Sentimos no poder ayudarle.

  88. Hola
    para la determinación de proteína en leche mediante el método kjeldahl ¿cual es el método adecuado para realizarse?

    • “Hola buenos días.
      Es el método que se explica en la web. Sólo debe tener en cuenta que el contenido de agua de la leche es muy alto y por lo tanto es necesario hacer un primer paso (el de evaporación) más largo que para un producto sólido. Por ejemplo entre 2 ó 3 horas según la cantidad de muestra que ponga.

  89. Buenas tardes: en semilla de algodón durante la destilación se produce mucha espuma que pasa al destilado obtenido. Como se puede evitar esto?

    • “Hola, buenos días.
      Pude añadir unas gotas de silicona o algún antiespumante que no interfiera en la recuperación de nitrógeno.

  90. hola, buenos días.

    La técnica es muy clara, solo tengo algunas dudas sobre el catalizador.

    • “Hola buenas tardes. El catalizador que utilizamos nosotros es un producto de PANREAC ya preparado.
      De todas formas puede encontrar más información en otros fabricantes o en la web.

      • Gracias, por su respuesta.

        disculpe en la parte de la disolución, sí el tubo del equipo es micro, es posible agregar menos cantidad de agua destilada (menor a 25 ml).

        cabe mencionar que no he realizado ese paso anteriormente, ya que posteriormente a la digestión solo dejo enfriar los tubos y continúo con la destilación.

        por último la verificación de la recuperación con sulfato de amonio. solo es utilizable para muestras en alimentos o también puede ser utilizada para suelos?

        • “Hola, buenos días.
          Añadir agua después de la digestión tienen como único objetivo que la reacción que se produce al añadir NaOH sea menos violenta.
          En tubo micro aconsejamos añadir 10 ml únicamente pero si hasta ahora lo ha hecho sin añadir agua puede continuar haciéndolo.
          Con respecto al sulfato de amonio es patrón para cualquier tipo de muestra. Al digerir una muestra, alimentaria, suelo, aguas,… se transforma todo el nitrógeno orgánico precisamente en sulfato de amonio. Por eso se utiliza como patrón para la destilación.


        • “Hola, buenos días.
          Añadir agua después de la digestión tienen como único objetivo que la reacción que se produce al añadir NaOH sea menos violenta.
          En tubo micro aconsejamos añadir 10 ml únicamente pero si hasta ahora lo ha hecho sin añadir agua puede continuar haciéndolo.
          Con respecto al sulfato de amonio es patrón para cualquier tipo de muestra. Al digerir una muestra, alimentaria, suelo, aguas,… se transforma todo el nitrógeno orgánico precisamente en sulfato de amonio. Por eso se utiliza como patrón para la destilación.

          • Hola, buenos días.

            Gracias por su respuesta, me resultó de gran ayuda.


  91. hoka si me podrian dar alguna norma respecto al metodo que se llevo acabo

  92. buenas tardes ¿que factor de conversión es el adecuado para EL ANALISIS EN FRUTAS?

    • “Buenos días.
      Desconocemos este factor.
      Por si le sirve de referencia tenemos:
      General: 6 25
      Prodt. lácteos: 6.38
      Soja: 5.71
      Arroz: 5.95
      Harinas: 5.70
      Harinas intgr.: 5.83
      Cereales: 5.83
      Almendras: 5.18
      Frutos secos: 5.30
      Debería consultar la norma que aplica a la fruta que desea analizar.

  93. Excelente información.

    Tengo una duda, es posible utilizar el método Kjeldahl para determinar concentración de urea en aguas de riego?

    Saludos cordiales.

  94. hola me pueden ayudar con la determinacion de la proteina total de los alimentos

  95. Buen día, quisiera consultar a qué se debe el color marrón al comenzar la destilación. A mí me ocurre que al agregarle el hidróxido de sodio no se torna marrón, pero al inicial la destilación sí.
    Desde ya, muchas gracias

    • “Buenos días.
      Suponemos que se refiere al color marron-negro que aparece en el tubo de muestra durante la destilación.
      Es debido a las reacción que se produce ente el ácido sobrante de la digestión y el hidróxido de sodio.
      Si el hidróxido de sodio está muy en exceso y ha utilizado catalizador de sulfato de cobre el color que se formará será azul.

  96. Buenos días,

    Estamos teniendo problemas con el equipo de proteína. Hemos llevado a cabo varias pruebas de acetanilida y hemos tenido varios tubos con recuperaciones del 98%. Además, a la hora de hacer los sulfatos antes de destilar, la recuperación ha sido también del 98%. En estos cálculos hemos tenido en cuenta la riqueza de los reactivos. ¿Sabrían decirme el motivo de estas desviaciones?. Hemos revisado tiempos de digestión, temperaturas, cantidades de reactivos (sulfúrico, naoh, catalizador), y en principio no hemos visto anomalías. En la destilación, tampoco tenemos pérdidas por problemas de funcionamiento del equipo. ¿Podríamos tener problemas en la valoración con HCL?.

    • “Hola buenos días.
      Efectivamente, la normalidad del ácido de valoración es uno de los factores de error más comunes.
      Por ejemplo, supongamos que utiliza para la valoración un ácido clorhídrico 0.1N nominal y que por algún motivo la concentración real sea del 0.105N. (si el ácido lleva algún tiempo preparado la evaporación de parte del agua que contiene aumenta su concentración)
      Al encontrase el reactivo de valoración más concentrado el consumo será menor y por lo tanto obtendrá un resultado de valoración inferior al 100%
      Siguiendo el ejemplo si tuviera que valorar una muestra que contenga 10.057 mg de nitrógeno el consumo de reactivo de valoración 0.105N sería de 6.84 ml
      mientras que el de reactivo 0.1N sería de 7.18.
      Así pues, al utilizar un reactivo 0.105 N para valorar pero aplicar para los cálculos el valor nominal 0.1N obtendría una recuperación del 95.4%.

      • Muchas gracias por la respuesta.

        ¿Qué consejos nos daría para evitar que la normalidad del clorhídrico sea un factor de error?.
        ¿Qué tipo de HCL debemos usar, en que formato de volumen?. ¿Es conveniente valorarlo periódicamente?. Hasta ahora lo estamos haciendo y la valoración es complicada y no da resultados con buena repetibilidad.
        He leído en las cuestiones anteriores que es recomendable meterlo en la nevera si no se usa.

        Y quisiera hacerles otra pregunta; Si tenemos una tanda de acetanilida de 8 tubos y se van tres fuera del 100 +/- 1%, tendríamos que invalidar la tanda? ¿Buscamos incidencias?

        Gracias de antemano. Un saludo¡

        • Hola Verónica,

          La normalidad es un factor de error que siempre hay que tener en cuenta.
          Lo ideal sería tener un ácido de valoración contrastado. Esto se puede conseguir utilizando para cada día una botella de ácido certificado nueva. Pero esto es un gasto muy elevado y no es viable.
          Otra opción es valorar el ácido diariamente pero como dice es un proceso complicado y muy crítico. Hay que “hacerlo muy bien” para que sea fiable.
          Una posibilidad para solucionar este problema, siempre y cuando se pueda ajustar a su proceso, es estimar la normalidad del ácido de valoración realizando una tanda de 5 (por ejemplo) patrones de amonio sulfato antes de empezar una tanda de muestras.
          El proceso de preparación de patrones de amonio sulfato no es excesivamente complicado. Basta trabajar con cierto esmero para preparar patrones correctos.
          Evalúe los patrones en su destilador kjeldahl y ajuste la normalidad del ácido a los resultados que espera obtener.
          Por ejemplo, si los cinco patrones han dado una recuperación de aproximadamente 98.0% puede estimar la normalidad del ácido 0.002 puntos por encima de la indicada.
          Pongo una tabla como ejemplo en la que se observan en la segunda columna la masa del amonio sulfato, en la tercera la cantidad de nitrógeno que contiene, la cuarta el volumen teórico de reactivo de valoración, en la quinta el consumo real en la valoración en la sexta la cantidad de nitrógeno que corresponde a ese consumo (el nitrógeno detectado) y en la última el % de recuperación.
          Datos obtenidos con una normalidad teórica de 0.100N .


          Se observa en todos los caso que la recuperación es inferior a lo esperado.
          Estos serian los datos obtenidos suponiendo la normalidad 0.102N


          Esto se puede aplicar si tenemos la seguridad de que la baja recuperación no es causada por perdidas en el equipo pero normalmente, si hay perdidas en el equipo, los resultados no son repetitivos y las recuperaciones son dispares.
          Por otro lado, al hacer esta estimación de la normalidad basada en patrones, “eliminamos” los pequeños errores asociados a balanza, la bureta de valoración,…

          Con respecto al nuestro consejo de colocar el ácido de valoración en la nevera, es debido a que una botella de reactivo, una vez abierta, tiene tendencia a perder humedad por evaporación con lo cual aumenta su normalidad.

          La normalidad que deben usar está en función del tipo de muestra que quieran valorar, más concretamente de la cantidad de nitrógeno que contenga.
          Aconsejamos que el consumo de reactivo en la valoración esté entre 5 y 10 ml. Aunque en ocasiones , si las muestras son muy dispares en cuanto a cantidad de nitrógeno, esto no es posible.
          Imagine que tiene una muestra con un contenido de aproximadamente 2mg de nitrógeno y otra con 40mg (aprox)para la primera aconsejamos una normalidad de 0.05N y para la segunda de 0.25N.
          Si valora las dos con 0.25N en la primera muestra tendrá un consumo aproximado de 0.60 ml y perderá resolución con lo que 0.01ml de más o de menos puede significar un resultado fuera del rango aceptado. Sin embargo si valora con normalidad 0.05N la primera muestra consumirá aproximadamente 3ml mientras que la segunda del orden de 60ml lo que le producirá una valoración muy lenta, con mucho consumo de reactivo y tiempo.
          Si sus muestras son más o menos homogéneas utilice una normalidad que se adapte al consumo que hemos aconsejado antes, entre 5 y 10 ml Si no es este el caso tendrá que valorar cual es la normalidad que más le conviene o si debe valorar cada grupo de muestras con una cantidad de nitrógeno homogénea con una normalidad diferente.

          Respecto a la pregunta sobre la acetanilida, tener tres resultados fuera de rango sobre ocho, es un porcentaje muy alto pero deben ser ustedes los que decidan si lo aceptan como válido en función de las circunstancias, de si se repiten estos errores en otras tandas, si se dan siempre en las mismas posiciones del bloque digestor, si había diferencia en la preparación de los patrones,…


          • Buenos días,

            Muchas gracias por su respuesta nos ha sido de gran ayuda.
            Hemos puesto en marcha el tema de realizar 5 sulfatos para calcular la normalidad del HCL, pero en la prueba de la acetanilida estamos teniendo valores muy elevados, con recuperaciones todas superiores al 100 y varios tubos mayores de 101. Hemos probado a bajar el tiempo de digestión y han salido valores más altos. ¿Dónde podemos tener la fuente de error para que tengamos más recuperación del 100%?

            Muchas gracias

          • “Buenos días. Si han obtenido buenos resultados con el sulfato de amonio probablemente el posible error esté en el proceso de preparación de las muestras/patrones.
            De todas formas piense que aceptamos valores correctos entre el 99 y el 101 %. Para conseguir recuperaciones entre el 99.5 y el 100.5 se requiere muchísimo rigor durante todos los pasos del proceso.
            Por otro lado piense que si ajustó la normalidad del reactivo de valoración hace dos días, está podría haber cambiado. Para mayor seguridad, si no lo han hecho así, hagan las pruebas de sulfato de amonio para ajustar la normalidad justo antes de destilar los patrones de acetanilida.

          • Buenos días,

            Llevamos un tiempo con la práctica de hacer 5 sulfatos por tanda y de ahí sacar la normalidad del clorhídrico. Mi consulta es la siguiente: Tras el cálculo de la normalidad de las diferentes tandas, observo que no lleva un patrón lógico, me explico. Las tandas por orden de días nos dan: 0.1008; 0.1009; 0.00999; 0.1005; 0.1002; 0.1029 y 0.1000. Así, no veo una repetibilidad en los datos, ya que creo que debería ir a más cada vez y va teniendo altibajos. ¿A que puede ser debido? ¿Nos podemos fiar de esos resultados?. En cada tanda, los sulfatos dan valores por encima y por debajo de 100, aceptamos todos los valores, habría que descartar algún valor?.

            Muchas gracias. Un saludo

          • “Hola, buenos días.
            Suponemos que los valores a los que hace referencia son de normalidad.
            Respecto a la repetitividad creemos que debería ser mejor. Y como dice en caso de variar debería aumentar. Sin embargo tenga en cuenta que está hablando de diferencias del orden de la diez-milésima en normalidad es posible que los equipos que utiliza no permitan mejor repetitividad.
            Puede ser debido a muchas causa. Podrían empezar por revisar el procedimiento que utilizan.
            Para conseguir valores repetitivos utilicen el patrón de amonio sulfato en disolución. Pueden preparar por ejemplo 10 g de amonio sulfato en un litro de agua destilada y valorar dosis de 5ml esto minimiza los posibles errores en la pesada. Utilice para las comprobaciones una buera digital con resolución de al menos 0.01 ml.
            Si tiene todo esto en cuenta y continua obteniendo valores aleatorios y no repetitivos debería revisar los equipos que utiliza. El destilados, la balanza,….
            Respecto a la aceptación o no de los resultados dependerá de ustedes mismo, de la tolerancia que les permita la normativa que estén aplicado o de la que acepten en su procedimiento.

  97. Buenosdías,

    Analizando una muestra de ctdo de nitróegeno conocido (Test FAPAS – conserva de pescado), obtenemos una concentración de N (expresado en mg N/100 g muestra) mucho menor de la indicada ( 4,45 mg/100 g en vez de 37 g/100 g), siguiendo el protocolo CE 2074/2005 paso a paso – comprobado minuciosamente.
    Fórmula final: TVB-N (mg/100g)= V HCl * 0,14 *2 *100 / P (g) muestra
    (Comprobado q el blanco no consume HCl)
    Sin embargo, sí obtenemos resultados correctos en el test de verificación del destilador ProNitro M Selecta con el compuesto acetato de amonio.
    Cualquier apunte o idea será muy bienvenida! Gracias!

    • “Hola , buenas tardes.
      Si el equipo ha respondido bien a las pruebas con patrones de sulfato de amonio, es probable que el problema esté en alguna parte del procedimiento.
      Se nos ocurre que el resultado tan bajo podría ser consecuencia de falta de NaOH en la muestra. La adicción de NaOH debe ser suficiente para neutralizar el ácido sulfúrico que queda después de la digestión o el perclórico después de la desproteinización.
      Aconsejamos que añadan más NaOH en la muestra en el momento de la destilación.”

  98. buenas tardes, para un ejercicio como el siguiente:

    Caudal de alimentación= 110 m3/h
    reactor anaeróbico, área= 200m2
    Concentración de AGV= 9,8
    DBO=1700 mg/l
    Relación DBO/BQO=0.6
    Eficiencia 89%

    Nutriente disponible Urea, concentración de Nitrógeno= 45% p/p

    Como se calcula los Kg de Urea a dosificar por m3 de agua tratada?

    • “Hola, buenos días.
      En este web sólo hacemos comentarios sobre dudas que tengan que ver con el proceso de determinación de nitrógeno por el método Kjeldahl.
      Sentimos mucho no poder ayudarte.

  99. Hola buenos días, yo tengo una duda con respecto a los cálculos para determinar el % de proteína.
    Resulta que hoy hice por primera vez el metodo Kjeldahl, pero al hacer los cálculos el porcentaje me da de forma exagerada.
    Mis datos son:
    1) peso de la muestra (LECHE): 4.0913g
    2) Volumen gastado de H2SO4: 15.55 ml
    3) normalidad H2SO4: 0.0972

    • “Hola buenos días. ¿Ha comprobado que el proceso y los reactivos son correctos?
      Le aconsejamos hacer pruebas primero con amonio sulfato para asegurarse que el destilador y los reactivos de valoración son correctos.
      Seguidamente validar el proceso completo con acetanilida.
      Si todo ha salido correcto tendrá que revisar los cálculos o el procedimiento de su muestra para ver donde puede estar el error.

  100. Hola
    Me podrían ayudar con una duda por favor. Estamos analizando muestras de pasto pero los valores obtenidos son muy altos. En nuestro equipo utilizamos 0,5g de muestra, 20ml de H2SO4 y uña pastilla catalizadora, esto se digesta al 100% de la potencia del digestor durante 20 minutos, seguido de una digestión al 65% de la capacidad durante una hora (método indicado por la marca del equipo). Después se destila con NaOH al 32% por 4 minutos con indicador mixto y titulamos con H2SO4 0,1N, los resultados obtenidos son del 14-15%, sin embargo al analizar las muestras con otro equipo obtengo 7% (valor correcto). Cuál puede ser el motivo de que esté obteniendo valores tan altos? Creen que debería aplicar otra rampa de temperaturas para muestras de pasto? Hemos repetido los análisis, le dimos mantenimiento a los equipos y se prepararon nuevamente todos los reactivos, sin embargo los resultados que al principio daban 17% solo conseguimos llegar hasta el 14% que le indico.

    • “Hola buenos días.
      Obtener valores superiores a lo esperado es debido generalmente a contaminación de reactivos o a problemas con el cálculo.
      Los problemas de contaminación se dan sobretodo en el proceso de destilación.
      Le aconsejamos que revise los reactivos. Asegúrese de que el agua destilada que utiliza para la destilación no está contaminada y sobre todo que la normalidad del ácido de valoración es la correcta. Según el tipo de destilador que utilice también puede ocurrir que parte del NaOH que añade para la reacción con la muestra pase arrastrado por el vapor al destilado con lo que los valores serian anormalmente altos.
      A parte de esto asegúrese de que los cálculos que realiza son correctos.

  101. hola buenas noches,

    es muy interesante toda la información y las dudas que se plantean como las respuestas que sacan de apuros, pero de igual forma quisiera saber a que temperatura debo colocar muestras de plantas donde busco conservar lo mejor posible el elemento cobre en la planta, ya que es mi factor de estudio. y de ahí realizar análisis, como vitamina C, fenoles totales, proteinas, sólidos solubles °brix, etc.

    para el caso de proteinas es recomendable utilizar el método Kjendahl, por lo que tengo entendido que se toman lectura de nitrógeno no orgánico e inorgánico. que error estaría presentandose en estos casos?.

    saludos y buen día.

    • “Hola.
      Respecto a la temperatura de conservación lo desconocemos. Debería consultar a la normativa que aplique o al método oficial que le corresponda.
      Respecto a la determinación de proteína, el método oficial es el Kjeldahl. Mediante este método se determina el nitrógeno orgánico y el ion amonio libre.
      Pueden aparecer interferencias debido a la presencia de nitritos y nitratos.
      le enviaremos por email unas notas de aplicación.

  102. todo esta muy bien explicado solo el factor de proteína al valorar la normalidad del acido a utilizar , multiplicas por el .014 que son los meq del nitrógeno es decir
    F= .045X.014X 6.25
    F= .0039375
    % PROTEINA= (FACTOR X ml gastados con el acido de titulación /gr de muestra )x 100=
    espero les sirva esta observación

Deja un comentario

Aún no hay trackbacks.